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胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）操作步驟

時間：2021/7/7閱讀：909

胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）操作步驟：
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

Aprotinin 2mg/5mg/10mg/100mg原裝 Roche11583794001

（蛋白酶抑制劑）

Aprotinin 6ku/25ku Usbio分裝

（抑蛋白酶肽,）

ATP,2Na,3H2O5'-三磷酸腺苷 1g/5g Amresco分裝

（ATP,2Na,3H2O5'-三磷酸腺苷）

Avidin 1mg原裝/2mg原裝 Sigma A9275

（親合素）

Bacitracin 500ku原裝/250ku原裝 Amresco E952

（）

Baird-ParkerAgarBase 2kg原裝/500g原裝 BD 276810

BarbitalSodium 25g原裝/100g原裝 Sigma B0500

（酸鈉）

BCIP 100mg/250mg/1g/10g原裝 Amresco 0885

BCIP/INT 100ml原裝 Amresco E116

BCIP/INT 100ml原裝 Amresco E692

b-Cyclodextran 5g/25g原裝/100g原裝 Sigma C4767

（b-環(huán)狀糊精）

BDliverVealAgar 500g原裝 BD 259100

BeefExtract 500g原裝/500g BD211520/國產(chǎn)

（牛肉膏）

BeefPowder 500g/北京產(chǎn)1kg OXOID LP0029

（牛肉粉）

Benzamidine,HCI 5g/25g Amresco分裝

（鹽酸苯甲脒,鹽酸芐脒）

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胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）操作步驟

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