TPS 試劑盒標(biāo)本激活方法:
1. 將450ul 標(biāo)本稀釋液加入到一支 1.5ml 進(jìn)口聚丙烯管中 , 再加 10ul 血清或血漿標(biāo)本。
2. 加20ul 1 N HC I ,蓋緊，上下混勻。 2 － 8 ℃ 放置60± 2 分鐘。
3. 加20ul 1 N NaOH, 蓋緊，上下混勻。
4. 即用，或放-20/-70 ℃ 保存3 天。計(jì)算結(jié)果時(shí)乘 以稀釋倍數(shù) 50 。 （ 注意：不同的標(biāo)本E2F1 的水平可能有較大差異，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況靈活掌握稀釋度）
5. 細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿 10 倍稀釋 (410ul 的標(biāo)本稀釋液＋ 50ul 樣本＋ 20ul 的 1N HCI+20ul 的 1N NaOH) 。
結(jié)果計(jì)算與判斷
1. 所有 OD 值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。
2. 以標(biāo)準(zhǔn)品20 00 、100 0 、500 、 250 、 125 、 62.5 、 31.2 、 0 pg /ml 為橫坐標(biāo)， OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3. 根據(jù)樣品 OD 值在該曲線圖上查出相應(yīng) E2F1 含量 ，再乘上稀釋倍數(shù)即可 。
試劑盒性能
1. 靈敏度 ： 最小的E2F1 檢測(cè)濃度小于 15 pg/ml。
2. 特異性： 可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人 E2F1 。 不與 人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于8.9％。
人骨肉瘤細(xì)胞；HOS
人慢性髓系白血病細(xì)胞；K562
人前列腺癌細(xì)胞；LNCaP
人乳腺癌細(xì)胞；MCF 7B
人急性淋巴母細(xì)胞性白血病細(xì)胞；MOLT-4
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H209
黑人Burkitt淋巴瘤細(xì)胞；RAJI
人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞；RAMOS
人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞；RAMOS(RA.1)
人腦瘤細(xì)胞；SF126
人腦瘤細(xì)胞；SF763
人腦瘤細(xì)胞；SF767
人皮膚黑色素瘤細(xì)胞；SK-MEL-1
人腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞；SW-13
人結(jié)直腸癌細(xì)胞；T84
人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞；THP-1
人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞；U251
人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞；U937 [U-937]
人胃腺癌細(xì)胞；BGC-823
人低分化肺腺癌細(xì)胞；GLC-82 [GLC82]
人喉癌上皮細(xì)胞；Hep-2
人纖維肉瘤細(xì)胞；HT-1080
人絨癌細(xì)胞；JEG-3
人耐VP16絨癌細(xì)胞株；JEG-3/VP16
白介素-2轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞；JEG-3/VP16-IL-2
TNFa轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞；JEG-3-VP16-TNFa
人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞；Jurkat, Clone E6-1
人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞；BE(2)-M17
