內(nèi)皮素-（ET-）ELISA試劑盒說明
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：96T
8pg/ml-200pg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中內(nèi)皮素-（ET-）含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人內(nèi)皮素-（ET-）水平。用純化的人內(nèi)皮素-
（ET-）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入內(nèi)皮素-（ET-），
再與HRP 標(biāo)記的內(nèi)皮素-（ET-）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗
滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終
的黃色。顏色的深淺和樣品中的內(nèi)皮素-（ET-）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測
定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人內(nèi)皮素-（ET-）濃度。
試劑盒組成
30 倍濃縮洗滌液20ml× 瓶7 終止液6ml× 瓶
2 酶標(biāo)試劑6ml× 瓶8 標(biāo)準(zhǔn)品（400pg/ml）0.5ml× 瓶
3 酶標(biāo)包被板2 孔×8 條9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液.5ml× 瓶
4 樣品稀釋液6ml× 瓶0 說明書 份
5 顯色劑A 液6ml× 瓶 封板膜2 張
6 顯色劑B 液6ml×/瓶2 密封袋 個(gè)
標(biāo)本要求
．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
200pg/ml 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品50µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入50µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
00pg/ml 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品50µl 的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50pg/ml 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品50µl 的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25pg/ml 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品50µl 的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.5pg/ml 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品50µl 的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，
然后再加待測樣品0µl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
重復(fù)5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
5 分鐘.
0. 終止：每孔加終止液50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止
液后5 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié)：
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡5-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，使用排槍加樣。
4．請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計(jì)
算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請(qǐng)避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
0. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。
保存條件及有效期
．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個(gè)月