犬腎上腺素(EPI)Elisa試劑盒操作步驟
. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
80 ng/L 5 號標準品 50µl的原倍標準品加入 50µl標準品稀釋液
40 ng/L 4 號標準品 50µl的5 號標準品加入 50µl標準品稀釋液
20 ng/L 3 號標準品 50µl的4 號標準品加入 50µl標準品稀釋液
0 ng/L 2 號標準品 50µl的3 號標準品加入 50µl標準品稀釋液
5 ng/L 號標準品 50µl的2 號標準品加入 50µl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,
然后再加待測樣品 0µl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復 5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50µl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
0 分鐘.
0. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止
液后 5 分鐘以內(nèi)進行。