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原代細(xì)胞
PCR試劑盒
RNA/DNA提取
血清
ATCC細(xì)胞
質(zhì)粒
細(xì)胞系

植物赤霉素(GA)ELISA 檢測試劑盒使用說明書

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植物赤霉素(GA)ELISA 檢測試劑盒試驗原理:

GA 試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知GA 濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將GA 和標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中GA 的濃度呈比例關(guān)系。

安全性

. 此試劑盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV為陰性,但沒有實驗室可*保證此血制品不會傳染肝炎、AIDS或其它傳染病,依據(jù)當(dāng)?shù)氐陌踩珬l例處理本試劑盒里的成份及血清和血漿等樣品。

2. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。

3. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

4. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

植物赤霉素(GA)ELISA 檢測試劑盒操作注意事項

. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。

2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。

3. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6. 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

7. 底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

8. 加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

9. 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

試劑的準(zhǔn)備

. 標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:

40 nmol/L

(6號標(biāo)準(zhǔn)品)

原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。

20 nmol/L

(5號標(biāo)準(zhǔn)品)

00ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入00ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

0 nmol/L

(4號標(biāo)準(zhǔn)品)

00ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入00ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

5.0 nmol/L

(3號標(biāo)準(zhǔn)品)

00ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入00ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.5 nmol/L

(2號標(biāo)準(zhǔn)品)

00ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入00ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

.25 nmol/L

(號標(biāo)準(zhǔn)品)

00ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入00ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

0 nmol/L

(空白對照)

原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

植物赤霉素(GA)ELISA 檢測試劑盒操作步驟

. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。

2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育小時。

4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作四次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作四次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。

8. 取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。

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