轉(zhuǎn)染技術(shù)是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細胞的技術(shù)，它是研究基因表達調(diào)控，突變分析等的常規(guī)工具。隨著功能研究的興起，其應(yīng)用越來越廣泛。以下就向大家介紹一些轉(zhuǎn)染的技術(shù)要點及市面上主要的轉(zhuǎn)染試劑類型的選擇。
   常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類，一類是瞬時轉(zhuǎn)染，一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（*轉(zhuǎn)染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細胞中可存在多個拷 貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動子和其它調(diào)控元件的分析。一般來說，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-96小時內(nèi)（依 賴于各種不同的構(gòu)建）分析結(jié)果，常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測。后者也稱穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也 可能作為一種游離體（episome）存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉(zhuǎn)染細 胞能整合，通常需要通過一些選擇性標(biāo)記，如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶（APH；*抗性基因），潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反復(fù)篩選，得到 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細胞系。
   轉(zhuǎn)染效率收多種因素影響，主要因素有下面幾個：

1. 細胞培養(yǎng)物

   健康的細胞培養(yǎng)物是成功轉(zhuǎn)染的基礎(chǔ)。不同細胞有不同的培養(yǎng)基，血清和添加物。低的細胞代數(shù)（<50）能確?；蛐筒蛔儭８叩霓D(zhuǎn)染效率需要一定的細胞 密度，一般的轉(zhuǎn)染試劑都會有專門的說明。*在轉(zhuǎn)染前24小時分細胞，這將提供正常細胞代謝，增加對外源DNA攝入的可能。一定要避免細菌，支原體或真菌 的污染。

2. 血清

大多數(shù)培養(yǎng)基在使用前需要加血清。胎牛血清（FCS）經(jīng)常用到，便宜一點的有馬或牛血清。通常的，血 清是一種包含生長因子及其它輔助因子的不確切成分的添加物，對不同細胞的生長作用有很大的差別。血清質(zhì)量的變化直接影響轉(zhuǎn)染效率。因此在轉(zhuǎn)染前建議先測 (轉(zhuǎn)右)試出對細胞生長良好的血清批號，轉(zhuǎn)染時用同一批號的血清，并同時做負對照（不加轉(zhuǎn)染試劑及外源DNA）以測試細胞生長是否正常。有些轉(zhuǎn)染技術(shù)如脂 質(zhì)體轉(zhuǎn)染在有血清存在情況下效率很低，因此在轉(zhuǎn)染前要除血清。但有些對此敏感的細胞如原代細胞會受到損傷，甚至死亡導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率極低。

3. 載體構(gòu)建

   轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建（病毒載體，質(zhì)粒DNA，RNA，PCR產(chǎn)物，寡核苷酸等）也影響轉(zhuǎn)染結(jié)果。病毒載體對特定宿主細胞感染效率較高，但不同病毒載體有其特定 的宿主，有的還要求特定的細胞周期，如逆轉(zhuǎn)錄病毒需侵染分裂期的宿主細胞，此外還需考慮一些安全問題（如基因污染）。除載體構(gòu)建外，載體的形態(tài)及大小對轉(zhuǎn) 染效率也有不同的影響，如前面提到的超螺旋及線性DNA對瞬時和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的影響。如果基因產(chǎn)物對細胞有毒性作用，轉(zhuǎn)染也很難進行，因此選擇組成或可調(diào)控， 強度合適的啟動子也很重要，同時做空載體及其它基因的相同載體構(gòu)建的轉(zhuǎn)染正對照可排除毒性影響的干擾。

4. DNA質(zhì)量

   DNA質(zhì)量對轉(zhuǎn)染效率影響非常大。一般的轉(zhuǎn)染技術(shù)（如脂質(zhì)體等）基于電荷吸引原理，如果DNA不純，如帶少量的鹽離子，蛋白，代謝物污染都會顯著影響轉(zhuǎn)染 復(fù)合物的有效形成及轉(zhuǎn)染的進行。核酸純化世界一品牌德國QIAGEN公司提供的超純質(zhì)粒抽提試劑盒，能達到兩倍2x CsCl梯度離心以上的純度效果，使您不必為DNA質(zhì)量操心。此外，對一些內(nèi)毒素敏感的細胞（如原代細胞，懸浮細胞和造血細胞），QIAGEN還提供可去 除內(nèi)毒素污染的質(zhì)粒抽提試劑盒，在質(zhì)粒抽提過程中有效去除脂多糖分子，保證理想的轉(zhuǎn)染效果。

5.轉(zhuǎn)染技術(shù)

   轉(zhuǎn)染技術(shù)的選擇對轉(zhuǎn)染結(jié)果影響也很大，許多轉(zhuǎn)染方法需要優(yōu)化DNA與轉(zhuǎn)染試劑比例，細胞數(shù)量，培養(yǎng)及檢測時間等。一些傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，如DEAE右旋糖苷法，磷酸鈣法，電穿孔法，脂質(zhì)體法各有利弊，其主要原理及應(yīng)用特點見下：

轉(zhuǎn)染方法 原理 應(yīng)用 特點

  DEAE-右旋糖苷法

帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細胞內(nèi)吞 瞬時性轉(zhuǎn)染 相對簡便、結(jié)果可重復(fù)但對細胞有一定的毒副作用，轉(zhuǎn)染時需除血清
磷酸鈣法
磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細胞膜被細胞內(nèi)吞 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時性轉(zhuǎn)染 不適用于原代細胞，操作簡便但重復(fù)性差，有些細胞不適用。
  電穿孔法
高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導(dǎo)入 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時性轉(zhuǎn)染，所有細胞 適用性廣但細胞致死率高，DNA和細胞用量大，需根據(jù)不同細胞類型優(yōu)化電穿孔實驗條件

陽離子性的脂質(zhì)體法
帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復(fù)合物被細胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

瞬時性轉(zhuǎn)染，所有細胞 適用性廣，轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好但轉(zhuǎn)染時需除血清

轉(zhuǎn)染效果隨細胞類型變化大

病毒介導(dǎo)法
逆轉(zhuǎn)錄病毒 通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，特定宿主細胞 可用于難轉(zhuǎn)染的細胞、原代細胞，體內(nèi)細胞等，但攜帶基因不能太大
細胞需處分裂期，需考慮安全因素 ，腺病毒 瞬時轉(zhuǎn)染，特定宿主細胞 可用于難轉(zhuǎn)染的細胞，需考慮安全因素。

Biolistic 顆粒傳遞法
將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞，DNA在胞內(nèi)逐步釋放，表達瞬時性轉(zhuǎn)染 可用于：人的表皮細胞，纖維原細胞，淋巴細胞系以及原代細胞

顯微注射法
用 顯微操作將DNA直接注入靶細胞核 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時性轉(zhuǎn)染 轉(zhuǎn)染細胞數(shù)有限，多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細胞 。