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廈門慧嘉生物科技有限公司
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更新時間：2018-04-03 04:33:03瀏覽次數(shù)：445次
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廈門慧嘉生物*經(jīng)營人雙氫睪酮(DHT)ELISA試劑盒。誠信經(jīng)營，價格實惠，服務周到，質(zhì)量有保證。歡迎廣告老師來詢！: :
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人雙氫睪酮(DHT) ELISA快速檢測試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用
檢測范圍： 1 ng /ml -256ng /ml
特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的人DHT，且與其他相關(guān)蛋白基本無交叉反應。
有效期：6個月(2-8℃避光保存)
預期應用：ELISA法定量測定人血清，血漿及其它相關(guān)生物液體中DHT含量。
說明
1. 濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
2. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。
實驗原理
采用競爭酶聯(lián)免疫法法檢測DHT含量。首先用一株單抗體包被微孔板，制備成固相抗體，然后加入待測標本及辣根過氧化物酶標記的另一株單抗，使之形成包被抗體-DHT-酶標記抗體的復合物。經(jīng)顯色后在酶標儀測定吸光值(OD值)，通過計算機或作圖擬合濃度-吸光度曲線，反算出待測標本中DHT含量。
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板(Assay plate )： 一塊(96孔)。
2. 標準品(Standard)： 5瓶(凍干品)。
標準品為凍干品，使用前分別用0.5ml蒸餾水溶解，溶解后濃度分別為：
Standard 1 Standard 2 Standard 3 Standard 4 Standard 5
1ng/ml 4ng/ml 16ng/ml 64ng/ml 256ng/ml
3. 酶結(jié)合物(HRP-conjugated antibody)： 1×6ml/瓶。
4. 顯色劑A(Substrate A)： 1×7ml/瓶。
5. 顯色劑B(Substrate B)： 1×7ml/瓶。
6. 濃洗滌液(Wash Buffer)： 1×15ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋20倍。
7. 終止液(Stop Solution)： 1×7ml/瓶
需要而未提供的試劑和器材
1. 標準規(guī)格酶標儀
2. 高速離心機
3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱
4. 干凈的試管和Eppendof管
5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器
6. 蒸餾水，容量瓶等
標本的采集及保存
1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
注：以上標本置4℃保存應小于1周，-20℃或-80℃均應密封保存，-20℃不應超過1個月，-80℃不應超過2個月；標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
操作步驟
1. 將各種試劑至室溫〔18-25℃〕平衡半小時，取濃縮洗滌液，根據(jù)當批檢測數(shù)量，用蒸餾水上1：20稀釋，混勻后備用。
2. 標準品Standard 1- Standard 5，*次使用前先用0.5ml蒸餾水溶解，放置混勻后使用。
3. 將酶標板取出，設一個空白對照孔、不加任何液體；每個標準點依次各設兩孔，每孔加入相應標準品50ul；其余每個檢測孔直接加待測標本50ul。
4. 每孔加入酶結(jié)合物50ul(空白對照孔除外)，充分混勻，貼上不干膠封片，置37℃溫育2小時。
5. 手工洗板，棄去孔內(nèi)液體。洗滌液注滿各孔，靜置10秒甩干，重復三次后拍干；洗板機洗板，選擇洗滌三次程序，洗板后拍干。
6. 每孔加顯色劑A液50μl，顯色劑B液50μl，振蕩混勻后，37℃避光顯色15分鐘，每孔加終止液50μl。
7. 用酶標儀讀數(shù)，取波長450nm，先用空白孔調(diào)零點，然后測定各孔OD值。
數(shù)據(jù)處理
1. 手工作圖：用雙對數(shù)坐標紙，以標準品濃度為橫軸，以對應的0D值為縱軸，畫出平滑曲線或直線，在曲線上按照待測血清OD值找到對應的濃度值。
2. 計算機：使用線性擬合功能，應將標準品S1-S5的濃度取對數(shù)(Log(濃度))作為X，將對應的OD值減去空白對照孔OD值后取對數(shù)(Log(OD值-NSB))作為Y，進行線性擬合。再從擬合線上計算出待測血清濃度。
注意事項
1. 從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及所需預包被板條應置室溫
(18-25℃)平衡30分鐘后方可使用，余者應及時封好口，放回2-8℃中避光保存，以備后用。
2. 使用前試劑應搖勻。
3. 結(jié)果判斷須在反應終止后10分鐘內(nèi)完成。
4. 不同批號的試劑不可混用。
5. 加樣時應注意避免所用各試劑及樣品之間的交又污染。
6. 操作時，試劑盒內(nèi)每種試劑各使用一個吸頭，每一種標準品使用一個吸頭，每一個樣品各使用一個吸頭，吸頭一次性使用。
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