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廈門慧嘉生物科技有限公司
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更新時間:2018-04-19 11:35:09瀏覽次數(shù):774次
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廈門慧嘉生物*經(jīng)營人血管生長素(ANG)ELISA試劑盒。誠信經(jīng)營,價格實惠,服務(wù)周到,質(zhì)量有保證。歡迎廣告老師來詢!: :
產(chǎn)品名稱: 人血管生長素(ANG)ELISA Kit
產(chǎn)品英文: Human Angiogenin,ANG ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格: 96T
產(chǎn)品類別: 人細胞因子ELISA試劑盒[Human cytokin ELISA Kit
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人血管生長素(ANG)酶聯(lián)免疫吸附測定快速檢測試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用
特異性:本試劑盒可檢測ANG,且與其他相關(guān)蛋白基本無交叉反應(yīng)。
有效期:6個月(2-8℃避光保存)
預(yù)期應(yīng)用:ELISA法定量測定人血清,血漿及其它相關(guān)生物液體中ANG含量。
說明
1. 濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
2. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),此為正常現(xiàn)象,不會對實驗結(jié)果造成任何影響。
實驗原理
采用競爭酶聯(lián)免疫法法檢測ANG含量。首先用一株羊抗兔單抗體包被微孔板,制備成固相抗體,然后加入待測標本及辣根過氧化物酶標記ANG和抗ANG抗體。經(jīng)顯色后在酶標儀測定吸光值(OD值),通過計算機或作圖擬合濃度-吸光度曲線,反算出待測標本中ANG含量。
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板(Assay plate ): 一塊(96孔)。
2. 標準品(Standard): 5×0.5ml/瓶。
標準品為凍干品,使用前分別用0.5ml蒸餾水溶解,溶解后濃度分別為:
Standard 1 Standard 2 Standard 3 Standard 4 Standard 5
4 pg/ml 15.6 pg/ml 62.5 pg/ml 250 pg/ml 1000 pg/ml
3. 酶結(jié)合物(HRP-conjugate): 1×6ml/瓶。
4. 抗體(Antibody) 1×6ml/瓶。
5. 顯色劑A(Substrate A): 1×7ml/瓶。
6. 顯色劑B(Substrate B): 1×7ml/瓶。
7. 濃洗滌液(Wash Buffer): 1×15ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋20倍。
8. 終止液(Stop Solution): 1×7ml/瓶
需要而未提供的試劑和器材
1. 標準規(guī)格酶標儀
2. 高速離心機
3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱
4. 干凈的試管和Eppendof管
5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時,用多通道移液器
6. 蒸餾水,容量瓶等
標本的采集及保存
1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注:以上標本置4℃保存應(yīng)小于1周,-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存,-20℃不應(yīng)超過1個月,-80℃不應(yīng)超過2個月;標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
操作步驟
1. 將各種試劑至室溫〔18-25℃〕平衡半小時,取濃縮洗滌液,根據(jù)當批檢測數(shù)量,用蒸餾水上1:20稀釋,混勻后備用。
2. 將酶標板取出,設(shè)一個空白對照孔、不加任何液體;每個標準點依次各設(shè)兩孔,每孔加入相應(yīng)標準品50ul;其余每個檢測孔直接加待測標本50ul。
3. 每孔加入酶結(jié)合物50ul(空白對照孔除外),再各加入50ul抗體,充分混勻,貼上不干膠封片,置37℃溫育1小時。
4. 手工洗板,棄去孔內(nèi)液體。洗滌液注滿各孔,靜置10秒甩干,重復(fù)三次后拍干;洗板機洗板,選擇洗滌三次程序,洗板后拍干。
5. 每孔加顯色劑A液50μl,顯色劑B液50μl,振蕩混勻后,37℃避光顯色15分鐘,每孔加終止液50μl。
6. 用酶標儀讀數(shù),取波長450nm,先用空白孔調(diào)零點,然后測定各孔OD值。
數(shù)據(jù)處理
1. 手工作圖:用雙對數(shù)坐標紙,以標準品濃度為橫軸,以對應(yīng)的0D值為縱軸,畫出平滑曲線或直線,在曲線上按照待測血清OD值找到對應(yīng)的濃度值。
2. 計算機:使用線性擬合功能,應(yīng)將標準品S1-S5的濃度取對數(shù)(Log(濃度))作為X,將對應(yīng)的OD值減去空白對照孔OD值后取對數(shù)(Log(OD值-NSB))作為Y,進行線性擬合。再從擬合線上計算出待測血清濃度。
注意事項
1. 從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及所需預(yù)包被板條應(yīng)置室溫
(18-25℃)平衡30分鐘后方可使用,余者應(yīng)及時封好口,放回2-8℃中避光保存,以備后用。
2. 使用前試劑應(yīng)搖勻。
3. 結(jié)果判斷須在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完成。
4. 不同批號的試劑不可混用。
5. 加樣時應(yīng)注意避免所用各試劑及樣品之間的交又污染。
6. 操作時,試劑盒內(nèi)每種試劑各使用一個吸頭,每一種標準品使用一個吸頭,每一個樣品各使用一個吸頭,吸頭一次性使用。
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