[測(cè)定方法] ELISA法
[方法學(xué)原理] 在微孔板上預(yù)包被純化的柯薩奇病毒抗原，樣本中的CXVAb-IgG可與微孔板上抗原結(jié)合，加入酶標(biāo)抗體后，與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合，在顯色劑作用下顯色，顏色的深淺與樣本中抗體含量呈正相關(guān)。
[標(biāo)本準(zhǔn)備] 靜脈抽血2ml，不抗凝。
[試劑]
1．微孔板
2．樣品稀釋液
3．酶聯(lián)試劑
4．陰性對(duì)照
5．陽性對(duì)照
6．洗滌劑
7．TMB顯色液
8．終止液
[儀器設(shè)備] 酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。
[測(cè)定步驟]
1．取標(biāo)本稀釋液100yl，加入反應(yīng)孔內(nèi)（陰性對(duì)照、陽性對(duì)照直接加入100ul對(duì)照血清），待檢血清各取10ul加入反應(yīng)孔內(nèi)，置37℃環(huán)境中反應(yīng)20min。
2．用洗板機(jī)洗滌5次，拍干。
3．每孔加入100tA酶結(jié)合物，置37℃環(huán)境中反應(yīng)20min。
4．洗板5次，拍干。
5．將底物A、B各50u1加入反應(yīng)孔內(nèi)，置避光顯色lOmin。
6．每孔加入終止液50rtl，混勻終止反應(yīng)。
7．空白對(duì)照孔調(diào)零，用450nm波長(zhǎng)檢測(cè)各孔 OD值，取臨界值（cut off）＝0．10+陰性對(duì)照平均OD值（陰性對(duì)照<0．05按o．05計(jì)算）。檢測(cè)標(biāo)本OD值<臨界值時(shí)，檢測(cè)結(jié)果為陰性；標(biāo)本檢測(cè)值≥臨界值時(shí)，檢測(cè)結(jié)果為陽性。
[正常參考值] CXVAb-IgG陰性
[注意事項(xiàng)]
1．使用前試劑盒應(yīng)預(yù)先在室溫環(huán)境中平衡30min。
2．試劑盒在2～8C避光保存，啟用后應(yīng)盡快用完。
3．不同批次的試劑組分不能混用。
4．實(shí)驗(yàn)后試劑、血清標(biāo)本均應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)。
5．用滴瓶滴加時(shí)，滴瓶應(yīng)垂直，用力和速度應(yīng)均勻，加樣后充分混勻。
[臨床意義] 柯薩奇病毒特異性抗體IgM出現(xiàn)早，消失也快，該抗體陽性提示現(xiàn)癥感染，有早期診斷價(jià)值?？滤_奇病毒特異性IgG為中和抗體，陽性提示既往感染，但檢測(cè)患者急性期及恢復(fù)期雙份血清抗體效價(jià)升高4倍有診斷意義。
會(huì)員1.png)