[測(cè)定方法] ELISA法
[方法學(xué)原理] 在微孔表面包被純化的HSV抗原。被稀釋過的患者血清加入微孔中。如存在HSV-ⅡAb—IgG可與微孔上抗原相結(jié)合。然后洗去未結(jié)合物質(zhì)，再加入酶聯(lián)液，與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合。洗去過量的酶聯(lián)液。zui后加入底物和色原（顯色液）。在特定時(shí)間終止酶聯(lián)液的催化反應(yīng)。所產(chǎn)生的顏色強(qiáng)度與標(biāo)本中HSV—ⅡAb-IgG含量呈正相關(guān)。通過酶標(biāo)儀與校正和對(duì)照相比，讀出結(jié)果。
[標(biāo)本準(zhǔn)備] 靜脈抽血2ml，不抗凝。
[試劑]
1．微孔板
2．樣品稀釋液
3．HRP-抗人IgG酶結(jié)合物
4．陰性對(duì)照
5．陽(yáng)性對(duì)照
6．洗滌劑
7．TMB顯色液
8．終止液
[儀器設(shè)備] 酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。
[測(cè)定步驟]
1．吸取5ul血清標(biāo)本加入250ul標(biāo)本稀釋液中，做1：51稀釋。
2．吸取100ul稀釋過的血清、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和校正液（不稀釋），加入微孔板內(nèi)，設(shè)空白對(duì)照1孔。振蕩混勻，去除孔內(nèi)液體中氣泡，室溫環(huán)境中孵育20min。
3．棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗5次。
4．每孔再加入100ul酶聯(lián)結(jié)合物，室溫環(huán)境中孵育20rain。
5．棄去孔中酶聯(lián)液，用洗滌液洗5次。
6．每孔加入100ul TMB顯色液，室溫環(huán)境中孵育10min。
7．每孔加人100rd終止液，終止反應(yīng)，充分混勻。
8．用酶標(biāo)儀（波長(zhǎng)為450nm）讀取吸光度。以待測(cè)樣本吸光度大于校正液孔吸光度為陽(yáng)性。
[注意事項(xiàng)]
1．整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊(cè)和生物安全守則規(guī)定，嚴(yán)防交叉污染。
2．所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
3．試劑應(yīng)保存于2～8℃冰箱，使用前應(yīng)在室溫環(huán)境中平衡30rain。
4．洗滌時(shí)各孔均應(yīng)加滿洗滌液，防止孔內(nèi)有游離酶未洗凈，每次洗板后均應(yīng)在吸水紙上拍干。
5．血標(biāo)本應(yīng)分離出血清保存，2～8℃可保存?d，冷凍保存可至6個(gè)月，避免反復(fù)凍融。
6．試劑在儲(chǔ)存或使用過程中，禁止過熱、曝曬或強(qiáng)光。
[正常參考值] HSV—ⅡAb-IgG陰性
[臨床意義] HSV先天性感染主要是通過胎盤引起宮內(nèi)感染，誘發(fā)早產(chǎn)、死胎、胎兒畸形及腦、眼等多器官損害。HSV也可通過呼吸道或產(chǎn)道造成新生兒感染，可呈無(wú)癥狀隱性感染，也可引起不同形式或不同程度的臨床表現(xiàn)，輕者僅為口腔、皮膚、眼部皰疹，重者則呈中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染甚至全身性播散性感染。
HSVAb-IgM陽(yáng)性提示為患者感染早期或原發(fā)性感染。但I(xiàn)gM抗體因在檢測(cè)過程中易受各種因素的影響，出現(xiàn)假陰性結(jié)果，因此HSVAb—IgM陰性結(jié)果不能*排除HSV感染。HSVAb—IgG陽(yáng)性，說明曾經(jīng)感染這種病原體，具有一定免疫力。連續(xù)監(jiān)測(cè)IgG抗體水平，若IgG迅速升高到4倍以上的較高水平時(shí)，患者可能為HSV再次感染。
在HSV的兩個(gè)亞型中，HSV-I型主要通過呼吸道或與患者病損部位直接接觸而傳播，引起呼吸系統(tǒng)、皮膚黏膜病變，妊娠婦女感染該病毒可引起宮內(nèi)感染；HSV-Ⅱ型主要通過接吻和性交傳播，引起性器官病變和新生兒感染。
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