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技術(shù)文章

Northern雜交

閱讀：4015發(fā)布時(shí)間：2010-12-18

Northern雜交是指將待測(cè)RNA樣品經(jīng)電泳分離后轉(zhuǎn)移到固相支持物上，然后與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行固相液相雜交，用以檢測(cè)RNA的方法。其原理和方法與Southern雜交基本相同。兩者的區(qū)別主要在以下3個(gè)方面。

（一）檢測(cè)對(duì)象
所檢測(cè)的靶核酸是RNA。Northern雜交可用來(lái)對(duì)特異性mRNA定量以及確定其分子量。可以提取細(xì)胞總RNA直接電泳，用于mRNA和Northern分析，也可將mR—NA從總RNA中純化出來(lái)，然后再電泳分離，用于Northern分析。RNA極易被環(huán)境中的RNA酶降解，因此在制備RNA樣品時(shí)需要特別注意防止RNA被降解。所有器皿都要進(jìn)行處理，盡可能除盡RNA酶。

（二）RNA電泳
RNA樣品依其分子量大小在變性膠中進(jìn)行分離，凝膠中需加入變性劑（如乙二醛、甲醛、甲基氫氧化汞），防止RNA分子形成二級(jí)結(jié)構(gòu)（發(fā)夾結(jié)構(gòu)），維持其單鏈線(xiàn)性狀態(tài)。

（三）轉(zhuǎn)膜
電泳結(jié)束后，Northern雜交不需要再進(jìn)行變性和中和，直接采用毛細(xì)管虹吸法將膠中的RNA轉(zhuǎn)移至膜上，也可采用電轉(zhuǎn)移或真空轉(zhuǎn)移法。

 


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