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技術(shù)文章

肉毒梭菌分離培養(yǎng)的培養(yǎng)基

閱讀:1053發(fā)布時間:2011-4-21

(1)肝塊肉湯 牛肉膏20g,酵母浸膏48,蛋白胨48,*38,可溶淀粉18,蒸餾水1000ml。煮沸溶解,調(diào)pH8.0,過濾分裝試管。另將牛肝煮熟切成約3~4mm見方小塊,每一試管放入3~5個小塊。121℃滅菌20-30min。

(2)TPGYT肉湯 胰蛋白胨(*)50g,Bacto胨58,酵母浸膏20g,葡萄糖4S,硫乙醇酸鈉1e,蒸餾水1000ml。將所有成分溶解于水,調(diào)pH7.2。以15ml的量分裝采樣試管或以100mi的量分裝三角燒瓶內(nèi),121℃高壓15min。冰箱貯藏應于2周內(nèi)用完。臨用前應先將培養(yǎng)基隔水浴煮沸10一15min驅(qū)氧,迅速冷卻,再加入過濾除菌的1.5%*(1:250)水溶液lml。加酶后更不可貯存,應及早用去。

(3)M.W.D.Wren改良厭氧菌培養(yǎng)基 脫水肉粒1.58,置有螺蓋的試管中,加入18ml布氏肉湯復合物(Difo布氏肉湯30g,酵母浸膏5g,胰胨1g,蒸餾水1000m1)再加入氯化血紅素質(zhì)(haemin)5ug/m1,* 1ul/m1。121~C高壓滅菌15rain后,再加入2ml碳水化合物混合液(葡萄糖7g,纖維二糖1g,麥芽糖1g,可溶淀粉1g,蒸餾水100mi,過濾,滅菌)。在沸水浴中處理30min,冷涼后可接種檢樣,37℃培養(yǎng)18h觀察。

(4)D-環(huán)*-血晾脂 牛肉膏4s,Witt蛋白胨2s,蛋白胨28,酵母浸膏2g,葡萄糖lS(可不用),氯化鈉2Z,*2S,瓊脂15g,明膠5s,蒸餾水1000ml。沸至全溶,調(diào)pH7.6。121℃滅菌20min。冷卻到50~C時,加人50ml無菌脫纖牛血和D-環(huán)*重酒石酸鹽(使其終濃度為400gg/m1)?;靹颍瑑A注平板。經(jīng)37℃無菌檢驗后,貯于4~C冰箱備用。

(5)肝-犢肉-蛋黃瓊脂 肝浸湯50g,犢肉浸湯50g,蛋白胨20g,新胨1.3e,胰胨1.3g,等電性酪蛋白28,葡萄糖5s,可溶淀粉10g,氯化鈉5g,硝酸鈉28,明膠2z,瓊脂15g,蒸餾水1000ml。加熱溶解,調(diào)pH7.2~7.4。121~C高壓滅菌15min。涼到50~C時,加入1 21卵黃液40mi混合均勻,傾注平板,4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

(6)肉毒梭菌鑒別培養(yǎng)基 胰酪胨(BBL)40g,氯化鈉4s,酵母浸膏58,瓊脂13g,蒸餾水1000ml,pH7.6。高壓滅菌后立即加入D-葡萄糖10g,搖勻,冷卻到50℃時,加入濾過滅菌的*76ug/m1,*氧卡嘧啶4Ug/mL(作為選擇抑制劑)。臨用時加入不同水平的肉毒梭菌的抗毒素(0.51U/ml、1.01U/ml、1.51U/m1及2.0IU/mi):傾注于5ml的小平板中。
 


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