NiV和亨爪病毒（Hendravirus，HeV）非常類似，此兩種病毒在各種免疫學(xué)檢測中大多數(shù)都存在交叉反應(yīng)，因此，各種實驗室檢測技術(shù)中各種免疫學(xué)檢測都不能作為尼帕病毒病確診的依據(jù)。
①樣品的采集、運輸和保存。診斷用的樣品采集和運輸必須注意生物安全防護。將診斷用樣品運送到國外時，必須遵守我國相關(guān)的出入境法律法規(guī)，以及航空運輸協(xié)會的危險物品運輸規(guī)定。動物可能帶有病毒的組織樣品包括腦、肺、腎、脾、肝、淋巴結(jié)。這些臟器都應(yīng)采樣送檢。采集的樣品應(yīng)該在冰上或4℃下運輸，用干冰。在一20℃下保存不宜太久。
②用細胞培養(yǎng)進行病毒分離。在無菌情況下處理待測樣品。用密閉的勻漿器處理含10g／100ml組織樣品的懸浮液，如在密閉的金屬筒中用可以高壓滅菌的金屬球進行研磨，或者在罩／袋式勻漿器中用塑料袋進行研磨。樣品磨碎后，300g離心，將上清加入到培養(yǎng)的細胞體系中。NiV在很多種類的細胞中都容易生長，這有利于病毒分離。非洲綠猴腎細胞（Vero細胞）和兔腎細胞（RK-13）對NiV非常敏感。病毒感染細胞后的第3天出現(xiàn)CPE，如果沒有出現(xiàn)CPE，應(yīng)該再盲傳2次，每次培養(yǎng)5天。在低感染比情況下，NiV特征性CPE是出現(xiàn)細胞融合現(xiàn)象，經(jīng)過24～48h，有些融合的細胞可含有60個以上的細胞核。后期，NiV感染Vero細胞形成的融合細胞的細胞核分布在融合細胞的周圍。
③病毒的鑒定（RT-PCR方法）。用第七章的RT-PCR方法可以達到快速簡便地鑒定分離的病毒是否為NiV。如果發(fā)現(xiàn)RT-PCR檢測陽性的病料來自以前沒有報道過NiV疫情的地區(qū)，必須對RT-PCR陽性擴增產(chǎn)物進行測序，并核實序列是NiV序列后才達到病毒的鑒定目的。
④病毒的鑒定（VNT方法）。VNT采用引起50％細胞培養(yǎng)孔發(fā)生CPE的TCID50判定法。標準的NiV樣品以及待測的NiV樣品稀釋到每50fuL約含有100個TCID50的病毒。然后把它們加到96孔細胞培養(yǎng)板（平底）中，然后加上等體積EMEM培養(yǎng)基、倍比稀釋的NiV標準的抗血清，在37℃作用45min后，每孔加上2．4X104個Vero細胞，zui終每個孔大約200／AL。37℃培養(yǎng)3天后，觀察CPE。那些只加有細胞的孔，以及只加有細胞和抗血清的孔都不應(yīng)出現(xiàn)CPE。相反，那些加有細胞和病毒的孔都應(yīng)該出現(xiàn)CPE（細胞融合、死亡）。如果分離的病毒可以被標準的陽性血清中和，則分離的病毒可以判定為NiV類似的病毒；如果分離的病毒不能被標準的陽性血清中和，則分離的病毒判定為不是NiV。
疑似病例的判定標準
尼帕病毒病的疑似病例的判定標準是以下3項中任意1項，并且此陽性結(jié)果得到國家外來動物疫病診斷中心的確認。
*項：NiV特異性抗原免疫組化檢測陽性。
第二項：抗NiV血清抗體的VNT檢測陽性，NiV抗血清中和。
第三項：抗NiV血清抗體的ELISA檢測陽性或從病料中分離的病毒能夠被標準的抗
此外，根據(jù)上述第二項，可以判定被檢動物感染或曾經(jīng)感染了NiV類似的病毒。
確診病例的判定標準
尼帕病毒病的確診病例的判定標準足以下2項中任意1項并且此陽性結(jié)果得到國家外，來動物疫病診斷中心的確認。
*項：臨床病料中分離到NiV。
第二項：RT-PCR檢測出NiV特異性核酸。
注意：上述第二項必須*排除實驗室核酸污染的可能性。
