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gⅥ-cDNA噬菌粒文庫小規(guī)模的獲取和純化

閱讀：725發(fā)布時間：2010-7-26

[器材和試劑]
●通用設(shè)備及試劑以及以下的設(shè)備和試劑：
●無菌96孔帶蓋培養(yǎng)板（Costar）
●LBAT
●R408輔助噬菌體（Stratagene）
●振蕩孵育箱
●96孔復(fù)制板
●PEG/NaCl（
●PBS

[方法]
1．將克隆體接種到100ul LBAT 96孔培養(yǎng)板上，并在37℃過夜振蕩培養(yǎng)（180r/min）。
2．使用96孔復(fù)制板將其接種到裝有200ul LBAT的第二塊96孔培養(yǎng)板上，在37℃培養(yǎng)直到生長中期（大約1，5小時）。
3．在每一孔中加入10ul 2×1011TU/mlR408輔助噬菌體。
4．37℃無振蕩培養(yǎng)30分鐘。
5．37℃過夜振蕩培養(yǎng)。
6．4℃800g離心20分鐘，收集細胞。
7．將上清液轉(zhuǎn)移到一新的96孔培養(yǎng)板上，并加40pul PEG/NaCl。
8．將板放置于冰上1小時。
9．4℃800g離心20分鐘，收集噬菌體顆粒，小心除去上清液，在50ulPBS溶液中打散顆粒。

 


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