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閱讀:1944發(fā)布時(shí)間:2010-3-19
經(jīng)營(yíng):對(duì)照品,ELISA檢測(cè)試劑盒,透析袋,ELISA測(cè)試盒
2.1 美藍(lán)染色法2.1.1 呂氏堿性美藍(lán)染色液美藍(lán) 0.3g95%乙醇 30mL0.01%氫氧化鉀溶液 100mL將美藍(lán)溶解于乙醇中,然后與氫氧化鉀溶液混合。2.1.2 染色法將涂片在火焰上固定,待冷。滴加染液,染1~3min,水洗,待干,鏡檢。2.1.3 結(jié)果菌體呈藍(lán)色。
2.2 革蘭氏染色法2.2.1 結(jié)晶紫染色液結(jié)晶紫 1g95%乙醇 20mL1%草酸銨水溶液 80mL將結(jié)晶紫溶解于乙醇中,然后與草酸銨溶液混合。2.2.2 革蘭氏碘液碘 1g* 2g蒸餾水 300mL將碘與**行混合,加入蒸餾水少許,充分振搖,待*溶解后,再加蒸餾水至300mL。2.2.3 沙黃復(fù)染液沙黃 0.25g95%乙醇 10mL蒸餾水 90mL將沙黃溶解于乙醇中,然后用蒸餾水稀釋。2.2.4 染色法2.2.4.1 將涂片在火焰上固定,滴加結(jié)晶紫染色液,染1min,水洗。2.2.4.2 滴加革蘭氏碘液,作用1min,水洗。2.2.4.3 滴加95%乙醇脫色,約30s;或?qū)⒁掖嫉螡M整個(gè)涂片,立即傾去,再用乙醇滴滿整個(gè)涂片,脫色10s。2.2.4.4 水洗,滴加復(fù)染液,復(fù)染1min。水洗,待干,鏡檢。2.2.5 結(jié)果革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色。革蘭氏陰性菌呈紅色。注:亦可用1:10稀釋石炭酸復(fù)紅染色液作復(fù)染液,復(fù)染時(shí)間僅需10s。
2.3 耐酸性染色法(萎-倪二氏法)2.3.1 石炭酸品紅染色液堿性品紅 0.3g95%乙醇 10mL5%酚水溶液 90mL將品紅溶解于乙醇中,然后與酚溶液混合。2.3.2 3%鹽酸-乙醇濃鹽酸 3mL95%乙醇 97mL2.3.3 復(fù)染液呂氏堿性美藍(lán)染色液。2.3.4 染色法2.3.4.1 將涂片在火焰上加熱固定,滴加石炭酸品紅染色液,徐徐加熱至有蒸氣出現(xiàn),但切 不可使沸騰。染液如因蒸發(fā)減少時(shí),應(yīng)隨時(shí)添加。染5min,傾去染液,水洗。 2.3.4.2 滴加鹽酸-乙醇脫色,直至無(wú)紅色脫落為止(所需時(shí)間視涂片厚薄而定,一般為1~3min),水洗。2.3.4.3 滴加呂氏堿性美藍(lán)染色液,復(fù)染30s~1min,水洗,待干,鏡檢。2.3.5 結(jié)果:耐酸性細(xì)菌呈紅色,其他細(xì)菌、細(xì)胞等物質(zhì)呈藍(lán)色。
2.4 柯氏染色法2.4.1 染色液2.4.1.1 0.5%沙黃液。2.4.1.2 0.5%孔雀綠液。2.4.2 染色法2.4.2.1 將涂片在火焰上固定,滴加0.5%沙黃液,并加熱至出現(xiàn)氣泡,約2~3min,水洗。2.4.2.2 滴加0.5%孔雀綠液,復(fù)染40~50s。水洗,待干,鏡檢。2.4.3 結(jié)果布氏桿菌呈紅色,其他細(xì)菌及細(xì)胞呈綠色。
2.5 奧爾特氏莢膜染色法2.5.1 染色液沙黃 3g蒸餾水 100mL用乳缽研磨溶解。2.5.2 染色法將涂片在火焰上固定,滴加染色液,并加熱至產(chǎn)生蒸氣后,繼續(xù)染3min。水洗,待干,鏡檢。2.5.3 結(jié)果炭疽芽胞桿菌菌體呈赤褐色,莢膜呈黃色。
2.6 瑞氏染色法2.6.1 染色液瑞氏色素 0.1g甲醇 60mL用乳缽研磨溶解。2.6.2 染色法2.6.2.1 涂片待自然干燥后,滴加染色液,固定1min。2.6.2.2 加入等量蒸餾水(pH6.5),染色3~5min。2.6.2.3 用蒸餾水沖洗,待干,鏡檢。
2.7 鞭毛染色法2.7.1 染色液的配制2.7.1.1 甲液:稱丹寧酸5g、氯化高鐵(FeCl3)1.5g,溶于100mL蒸餾水中,待溶解后加入1%的氫氧化鈉溶液1mL和15%的*2mL。2.7.1.2 乙液:稱2g*溶于100mL蒸餾水中。在90mL乙液中滴加濃氫氧化銨溶液,到出現(xiàn)沉淀后,再滴加使其變?yōu)槌吻?,然后用其?/font>10mL乙液小心滴加至澄清液中,至出現(xiàn)輕微霧狀為止(此為關(guān)鍵性操作,應(yīng)特別小心)。滴加氫氧化銨和用剩余乙液回滴時(shí),要邊滴邊充分搖蕩,染液當(dāng)天配,當(dāng)天使用,2~3d基本無(wú)效。2.7.2 染色法在風(fēng)干的載玻片上滴加甲液,4~6min后,用蒸餾水輕輕沖凈。再加乙液,緩緩加熱至冒汽,維持約半分鐘(加熱時(shí)注意勿使出現(xiàn)干燥面)。在菌體多的部位可呈深褐色到黑色,停止加熱,用水沖凈,干后鏡檢,菌體及鞭毛為深褐色到黑色。
2.8 堿性復(fù)紅染色法將0.5g堿性復(fù)紅染料溶解于20mL95%乙醇中,然后用蒸餾水稀釋至100mL。如有不溶物時(shí),可用濾紙過(guò)濾,或靜置后取上清液備用。注:本染色液系用于蘇云金芽胞內(nèi)蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶的染色,藉以與*相區(qū)別
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