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弓形蟲抗體IgM(TOX Ab-IgM)檢測

閱讀:1724發(fā)布時間:2010-12-22

 

弓形蟲抗體IgM(TOX Ab-IgM)檢測

[測定方法] ELISA法
[方法學(xué)原理] 在微孔表面包被純化的弓形蟲抗原。被稀釋過的患者血清加入微孔中。如存在弓形蟲抗體可與微孔上抗原相結(jié)合。然后洗去未結(jié)合物質(zhì),再加入酶聯(lián)液,與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合。洗去過量的酶聯(lián)液。zui后加入底物和色原(顯色液)。在特定時間終止酶聯(lián)液的催化反應(yīng)。所產(chǎn)生的顏色強(qiáng)度與標(biāo)本中弓形蟲抗體含量呈正相關(guān)。通過酶標(biāo)儀與校正和對照相比,讀出結(jié)果。
[標(biāo)本準(zhǔn)備] 靜脈抽血2ml,不抗凝。
[試劑]
1.微孔板
2.樣品稀釋液
3.HRP-抗人IgM酶結(jié)合物
4.陰性對照
5.陽性對照
6.洗滌劑
7.TMB顯色液
8.終止液
[儀器設(shè)備] 酶標(biāo)儀或全自動酶聯(lián)免疫檢測儀。
[測定步驟]
1.吸取10ul血清標(biāo)本加入250u1標(biāo)本稀釋液中,做1:26稀釋。
2.吸取100ul稀釋過的血清、陽性對照、陰性對照和校正液(不稀釋),加入微孔板內(nèi),設(shè)空白對照1孔。振蕩,混勻,去除孔內(nèi)液體中氣泡,室溫環(huán)境中孵育20min。
3.棄去孔內(nèi)液體,用洗滌液洗5次。
4.每孔再加入100t.tl酶聯(lián)結(jié)合物,室溫環(huán)境中孵育20min。
5.棄去孔中酶聯(lián)液,用洗滌液洗5次。
6.每孔加入100gl TMB顯色液,室溫環(huán)境中孵育10min。
7.每孔加入100t.tl終止液,終止反應(yīng),充分混勻。
8.用酶標(biāo)儀(波長為450nm)讀取吸光度。以待測樣本吸光度大于校正液孔吸光度為陽性。
[注意事項(xiàng)]
1.整個檢測過程應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊和生物安全守則規(guī)定,嚴(yán)防交叉污染。
2.所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
3.試劑應(yīng)保存于2~8℃冰箱,使用前應(yīng)在室溫平衡30min。
4.洗滌時各孔均應(yīng)加滿洗滌液,防止孔內(nèi)有游離酶未洗凈,每次洗板后均應(yīng)在吸水紙上拍干。
5.血標(biāo)本應(yīng)分離出血清保存,2~8℃可保存7d,冷凍保存可至6個月,避免反復(fù)凍融。
6.試劑在儲存或使用過程中,禁止過熱、曝曬或強(qiáng)光。
[正常參考值] 抗—TOX IgM陰性。
 
 
 
 


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