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上海酶聯(lián)生物研究所


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經(jīng)營模式:生產(chǎn)廠家

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所在地區(qū):上海上海市

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大鼠極低密度脂蛋白使用方法

閱讀:416發(fā)布時間:2011-06-01

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使用目的:

本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中極低密度脂蛋白VLDL含量。

操作步驟

1.         標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

120μg/ml

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

60μg/ml

4號標準品

150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

30μg/ml

3號標準品

150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

15μg/ml

2號標準品

150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

7.5μg/ml

1號標準品

150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 

 

2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.         溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘。  

4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7.         溫育:操作同3

8.         洗滌:操作同5。

9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.

10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié):

1.準備試劑,樣品和標準品

2.加入準備好的樣品和標準品,37反應30分鐘

3.洗板5次,加入酶標試劑,37反應30分鐘

4.洗板5次,加入顯色液A、B,37反應10分鐘

5.加入終止液

6.15分鐘之內(nèi)度OD

7.計算

計算

  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。


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