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上海酶聯(lián)生物研究所


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現(xiàn)貨桔霉素(Citrinin)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書

閱讀:2222發(fā)布時間:2012-07-02

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    上海酶聯(lián)生物研究所

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桔霉素(Citrinin)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
1  使用目的:
本試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織(如雞、牛肉和豬肉),雞蛋、蜂蜜、牛奶、血
清和尿樣中桔霉素(Citrinin)殘留的定量檢測。
2  實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒采用競爭 ELISA 方法,在微孔板包被有桔霉素(Citrinin)偶聯(lián)抗原,加入桔霉
素(Citrinin)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離桔霉素(Citrinin)與微孔條上預(yù)包被的桔霉素(Citrinin)偶聯(lián)抗
原互相競爭抗桔霉素(Citrinin)抗體酶標(biāo)記物,用 TMB 底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色
變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下進(jìn)行檢測,吸光值與樣品中桔霉素(Citrinin)含量成反
比,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中桔霉素(Citrinin)的含量。
3  試劑盒組成
桔霉素(Citrinin)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書
3.1  預(yù)包被的桔霉素(Citrinin)偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1塊(12孔×8條)。
3.2  桔 霉 素 (Citrinin) 標(biāo) 準(zhǔn) 品 : 6 瓶 ( 1ml/ 瓶 ), 含 量 分 別 是 : 0ng/ml,
0.025ng/ml,0.1ng/ml,0.25ng/ml,1ng/ml,4ng/ml
3.3 抗桔霉素(Citrinin)抗體酶結(jié)合物:1 瓶(6ml)。
3.4 顯色液A:1瓶(6ml)。
3.5 顯色液B:1 瓶(6ml)。
3.6 終止液:1瓶(6ml),2M硫酸。
3.7 *:1瓶(10×,    6ml),用于樣品稀釋用。
3.8 濃縮洗滌液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。
3.9 說明書一份。
4  需要而未提供的材料
4.1  設(shè)備
4.1.1波長450nm酶標(biāo)儀。
4.1.2粉碎機(jī)。
4.1.3量筒。
桔霉素(Citrinin)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書
4.1.4振蕩器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman 或相當(dāng)?shù)臑V紙。
4.1.7微量移液器。
4.2  試劑
4.2.1去離子水或蒸餾水。
4.2.2 甲醇。
5  貯存
5.1  試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍
5.2  未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存
6  注意事項(xiàng)
6.1  使用試劑盒前請仔細(xì)閱讀說明書。2
6.2  不要使用過期試劑盒。
6.3  試劑盒使用前,將試劑恢復(fù)至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時。
6.4  標(biāo)準(zhǔn)品中含有桔霉素(Citrinin),使用時應(yīng)特別注意,操作時應(yīng)帶手套。
6.5  終止液中含有硫酸,使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。
6.6  不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用,否則會影響試驗(yàn)結(jié)果。
6.7  不同批號試劑盒中的試劑不得混用;不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用,否則會影響
實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6.8  稀釋樣本時必須用本試劑盒中的*,否則會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果
6.9  混合試劑時應(yīng)避免起泡。
7  工作液準(zhǔn)備
7.1 桔霉素(Citrinin)標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0ng/ml, 0.025ng/ml,0.1ng/ml,0.25ng/ml,1ng/ml,4ng/ml
7.2  濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用
7.3  *:備用
7.3  顯色劑:已備用,避免光線直照
7.4  反應(yīng)終止液:已備用
8  樣品處理程序(樣品在提取過程中,要嚴(yán)格按說明書操作,提取過程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋,否則
會出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確,樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存)
8.1取10g粉碎的樣品,加  20ml 70%甲醇溶液
8.2強(qiáng)力振蕩3分鐘
8.3用Whatman 濾紙過濾
8.4取25µl處理后的樣品,加入25µl*于反應(yīng)孔中(樣本稀釋倍數(shù)為2)
9  酶免分析步驟
9.1  實(shí)驗(yàn)須知
9.1.1 實(shí)驗(yàn)開始前請將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫(25±2℃),時間約2小時?;販刂潦?br />溫(25±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存
注:一定保證回溫充分,否則影響檢測的度和準(zhǔn)確度。
9.1.2 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存
9.1.3 請不要改變分析程序
9.1.4 請使用的微量移液器
9.1.5 操作一旦開始,請不要中斷任何程序
9.1.6 ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序,請嚴(yán)格按照要求操作
9.1.7 為避免交叉污染,每個標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣
9.1.8 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面
9.2  分析步驟
9.2.1 預(yù)*行編號,標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,推薦進(jìn)行雙孔檢測
9.2.2 取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
9.2.3 樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(10×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)
9.2.4 在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液
9.2.5 在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液
9.2.6 在各樣品孔中加入50µl樣品溶液
9.2.7 在所有孔中加入50µl的抗桔霉素(Citrinin)抗體酶結(jié)合物
9.2.8 輕輕晃動反應(yīng)板幾秒鐘。
9.3 37℃溫浴30min (溫浴過程中不時輕拍反應(yīng)板,可以減少雙孔誤差)3
9.3.1 甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液
體。
9.4  反應(yīng)
9.4.1  洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50µl顯色液A,再加  50µl顯
色液B;輕微晃動反應(yīng)板使之*混勻
9.4.2 37℃溫浴10min
9.4.3 每孔中加入50µl終止液,混勻
9.4.4 在450nm下檢測吸光度,結(jié)果在5min內(nèi)讀取。
10 結(jié)果計算
10.1定量分析
10.1.1所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以*個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))
的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0— 0µg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
10.1.2以桔霉素(Citrinin)濃度的對數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)
樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo),即為桔霉素(Citrinin)濃度的對數(shù)值,
求得反對數(shù)即為測定液中桔霉素(Citrinin)濃度C(ppb)
10.1.3由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋,因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋
倍數(shù)。
10.2 半定量測定
10.1.1目測半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光
度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。
10.1.2儀器半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色
深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。
11 特異性
物質(zhì) 交叉反應(yīng)
桔霉素(Citrinin) 100%
12 試劑盒參數(shù)
本試劑盒檢測下限為0.05ppb
B0吸光度*值應(yīng)大于1.0
試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,板間誤差小于15%。
用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。
13 標(biāo)準(zhǔn)曲線模式(僅供參考)
試 劑 盒 提 供 的 標(biāo) 準(zhǔn) 曲 線 范 圍 為 0ng/ml~4ng/ml 。4
14 分析限制 降鈣素 CISA試劑盒
 促甲狀腺素 TSHELISA試劑盒
 * CortisolELISA試劑盒
 雌二醇 E2ELISA試劑盒
 脫氫表雄酮硫酸酯 DHEA-SELISA試劑盒
 睪酮 ISA試劑盒
 游離睪酮 F-TESTOELISA試劑盒
 雄烯二酮 ASDELISA試劑盒
 雌三醇 E3ELISA試劑盒
 17羥孕酮 17-OHPELISA試劑盒
 三碘甲狀腺原氨酸 T3ELISA試劑盒
 甲狀腺素 T4ELISA試劑盒
 甲狀腺素 T4ELISA試劑盒
 游離甲狀腺素 FT4ELISA試劑盒
 游離三碘甲狀腺原氨酸 Free-T3ELISA試劑盒
 新生甲狀腺素 NN-T4ELISA試劑盒
 胰島素 INSELISA試劑盒
 C肽 C-PeptideELISA試劑盒
 絨毛膜* HCGELISA試劑盒
 絨毛膜*β β-CGELISA試劑盒
 促黃體激素 LHELISA試劑盒

本試劑盒檢測為陽性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。


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