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上海酶聯(lián)生物研究所


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48T人 白細(xì)胞介素6ELISA 檢測試劑盒

閱讀:294發(fā)布時間:2013-04-03

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    上海酶聯(lián)生物研究所

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人 白細(xì)胞介素6ELISA 檢測試劑盒       自備材料:蒸餾水
        加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。 樣品收集、處理及保存方法:血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人 白細(xì)胞介素6ELISA 檢測試劑盒     

操作注意事項:

     試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

人 白細(xì)胞介素6ELISA 檢測試劑盒     

安全性:

避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

試劑的準(zhǔn)備:

標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻

洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

試劑盒性能:

1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。


 

人 白細(xì)胞介素6ELISA 檢測試劑盒     

操作步驟:

使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混

37℃溫育5分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析:

1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的IL-6標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的IL-6含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度, 再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
3、檢測值范圍:0-800pg/ml
4、敏感度: 1.0 pg/m

人 白細(xì)胞介素6ELISA 檢測試劑盒     

DA2355-0.2ml MCP-1/CCL2 (monocyte chemotactic protein1)mouse, rat 單核細(xì)胞趨化蛋白1抗體(大、小鼠) 0.2ml
DA2356-0.2ml MCP-1/CCL2(Monocyte chemotactic protein 1)human 單核細(xì)胞趨化蛋白1抗體(人) 0.2ml
DA2357-0.2ml MCP-2/CCL8(Monocyte chemotactic protein 2)human 單核細(xì)胞趨化蛋白2抗體(人) 0.2ml
DA2358-0.2ml MCP-2/CCL8(Monocyte chemotactic protein 2)rat,mouse 單核細(xì)胞趨化蛋白2抗體(大、小鼠) 0.2ml
DA2359-0.2ml MCP-3/CCL7(Monocyte chemotactic protein 3)human 單核細(xì)胞趨化蛋白3抗體(人) 0.2ml
DA2360-0.2ml MCP-3/CCL7(Monocyte chemotactic protein 3)(rat,mouse) 單核細(xì)胞趨化蛋白3抗體(大、小鼠) 0.2ml
DA2361-0.2ml CCL9/CCL10/MIP-1 gamma(Macrophage inflammatory protein 1-γ) 巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1γ抗體 0.2ml
DA2362-0.2ml MC-1R (melanocortin-1-receptor) 黑皮質(zhì)素-1受體抗體 0.2ml
DA2363-0.2ml MCT1(monocarboxylate transporter 1) 單羧酸轉(zhuǎn)運蛋白-1抗體 0.2ml
DAR1158-0.1ml Rabbit anti-mouse IgM/APC  熒光素APC標(biāo)記兔抗小鼠IgM 0.1ml
DAR1159-0.1ml Rabbit anti-horse IgG/APC 熒光素APC標(biāo)記兔抗馬IgG 0.1ml
DA2364-0.2ml MCM2(minichromosome maintenance protein 2) 微小染色體維持缺陷蛋白2抗體 0.2ml
DA2365-0.2ml MCM3(minichromosome maintenance deficient 3) 微小染色體維持缺陷蛋白3抗體 0.2ml
DA2366-0.2ml MCM7(minichromosome maintenance protein 7) 微小染色體維持缺陷蛋白7抗體 0.2ml
 


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