污水處理設(shè)備 污泥處理設(shè)備 水處理過(guò)濾器 軟化水設(shè)備/除鹽設(shè)備 純凈水設(shè)備 消毒設(shè)備|加藥設(shè)備 供水/儲(chǔ)水/集水/排水/輔助 水處理膜 過(guò)濾器濾芯 水處理濾料 水處理劑 水處理填料 其它水處理設(shè)備
上海酶聯(lián)生物研究所
會(huì)員1.png)
上海酶聯(lián)生物研究所
經(jīng)營(yíng)模式：生產(chǎn)廠(chǎng)家
商鋪產(chǎn)品：4010條
所在地區(qū)：上海上海市
聯(lián)系人：采購(gòu)部 （經(jīng)理）
閱讀：356發(fā)布時(shí)間：2012-2-13
1)細(xì)胞制備
1．培養(yǎng)5ml酵母至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)早期(106～107細(xì)胞/ml)。
2．直接加1/10體積的甲醛到培養(yǎng)基里固定細(xì)胞(加入的甲醛終濃度為3.7％，標(biāo)準(zhǔn)母液是37％)。
3．細(xì)胞在甲醛中培養(yǎng)至少1小時(shí)。
4．離心收集細(xì)胞，用0.1mol/L磷酸鉀(pH7.5)洗一次。
5．把細(xì)胞懸浮在1ml的50mg/ml消解酶100T或50單位/ml的溶細(xì)胞酶[溶于含有2ml/ml 6-巰基乙醇的0.1mol/L的磷酸鉀溶液中]。
6．置30℃培養(yǎng)30分鐘，用相差顯微鏡檢查原生質(zhì)的生成率。細(xì)胞應(yīng)呈黑色或半透明灰色，亮細(xì)胞(折射體)屬于沒(méi)有充分被消化的。菌蛻屬消化過(guò)夜。
7．離心收集細(xì)胞，懸浮在1ml的PBS中。
2)染色
1．取10ml的1mg/ml聚賴(lài)氨酸，放到用特氟隆封閉的(Teflonmasked slides)載玻片(10孔載玻片)上的每個(gè)孔，再用蒸餾水洗載玻片，干燥。
2．放10ml固化細(xì)胞到每個(gè)孔中，幾分鐘后，用PBS抽洗3次。用顯微鏡檢測(cè)載玻片確保呈合適的密度而不聚集。
3．該步驟可任選(本實(shí)驗(yàn)不需要使用抗體，但建議使用)：把載玻片浸泡在冷甲醇(－20℃)6分鐘后，然后放到冷丙酮(－20℃)30秒，該處生理產(chǎn)生扁平細(xì)胞，有助于細(xì)胞骨架的觀(guān)察。對(duì)于一些抗體-抗原結(jié)合物，需要這些步驟重新活化，用PBS重新潤(rùn)濕?？?。
4．加15ml由PBS＋3％BSA(牛血清白蛋白)組成的阻斷緩沖液到?？字小Ｔ诒窈凶又?，如墊有濕紙巾的平板中保溫30分鐘。重要的是，在這期間不能讓載玻片孔干透(BSA可通過(guò)阻斷蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)降低非特異抗體結(jié)合到載玻片)。</P< p>
5．吸出阻斷緩沖液，用PBS＋3％BSA洗兩次。
6．加10～15ml*抗體(溶解在PBS＋3％BSA)到載玻片孔中，在一個(gè)保濕盒中保溫1小時(shí)。用親和純化抗體或單克隆抗體，如果可能，用缺乏目的抗原的同源對(duì)照。作一個(gè)沒(méi)有*抗體的對(duì)照也是有幫助的。
7．吸出*抗體，用PBS＋3％BSA洗3次。
8．用熒光第二抗體重復(fù)第6～7步(在暗處培養(yǎng))。
9．吸出第二抗體，用PBS＋3％BSA洗3次。
10． 加10～15ml的1μg/ml DAPI到載玻片孔中，培養(yǎng)約1分鐘，用PBS洗3次。
11． 吸出PBS，給每個(gè)孔加一小滴封固劑，放蓋玻片，避免在孔中出現(xiàn)氣泡。用紙巾除去多余的封固劑，小心不要移動(dòng)蓋玻片，用干凈的指甲油密封，－20℃下保存。
商鋪：http://www.niunang.cn/st32881/
主營(yíng)產(chǎn)品：ELISA試劑盒，人ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒，豚鼠ELISA試劑盒，兔ELISA試劑盒，羊ELISA試劑盒，牛ELISA試劑盒，雞ELISA試劑盒，鴨ELISA試劑盒，植物ELISA試劑盒
環(huán)保在線(xiàn) 設(shè)計(jì)制作，未經(jīng)允許翻錄必究 .? ? ?
請(qǐng)輸入賬號(hào)
請(qǐng)輸入密碼
請(qǐng)輸驗(yàn)證碼
請(qǐng)輸入你感興趣的產(chǎn)品
請(qǐng)簡(jiǎn)單描述您的需求
請(qǐng)選擇省份