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技術(shù)文章

血液樣本的收集與保存

閱讀:197發(fā)布時間:2015-9-9

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

標(biāo)本的存放溫度及時間,血清、血漿及細胞分離的方法步驟也是分析前影響檢驗結(jié)果的重要因素。抽血后,血細胞因代謝需要,要消耗掉部分營養(yǎng)成分,故對這些成分進行測定時,需及時地離心以分離掉細胞成分。

采血前個體的準備情況,如空腹時間的長短、采樣時間的確定及采血時患者的姿勢;*應(yīng)用時間,輸液情況,體育運動,抗凝劑及穩(wěn)定劑的選用;標(biāo)本的處理等均可影響到某些檢驗指標(biāo)的水平。故標(biāo)本采集過程應(yīng)標(biāo)準化,以zui大限度地減少分析前誤差。

一、不抗凝收集血清:

1、無添加劑的干燥空管收集:

血管內(nèi)壁均勻涂有防止掛壁的藥劑(硅油)。它利用血液自然凝固的原理使血液凝固,等血清自然析出后,離心使用。主要用于血清生化(肝功、腎功、心肌酶、*等)、電解質(zhì)(血清鉀、鈉、氯、鈣、磷等)、甲狀腺功能、藥物檢測、*、腫瘤標(biāo)志物、血清免疫學(xué)檢測。
    亦可直接用干燥EP管收集全血,充分靜置使得紅細胞充分自然凝固后,離心分離出血清待用或保存

2、用促凝管收集:

*內(nèi)壁均勻涂有防止掛壁的硅油,同時添加了促凝劑。促凝劑能激活纖維蛋白酶,使可溶性纖維蛋白變成不可溶性的纖維蛋白聚體,進而形成穩(wěn)定的纖維蛋白凝塊,如果想快點出結(jié)果時,可采用促凝管。一般靜置半小時到1小時,直接離心分離出血清待用或保存,用于急診生化。

3、含有分離膠及促凝劑的*收集

管壁經(jīng)過硅化處理,并涂有促凝劑可加速血液的凝固,縮短檢驗時間。管內(nèi)加有分離膠,分離膠與PET管具有很好的親和性,確實起到隔離作用,一般即使在普通離心機上,分離膠能將血液中的液體成分(血清)和固體成分(血細胞)*分開并積聚在試管中形成屏障。離心后血清中不產(chǎn)生油滴,主要用于血清生化(肝功、腎功、心肌酶、*等)、電解質(zhì)(血清鉀、鈉、氯、鈣、磷等)、甲狀腺功能、藥物檢測、*、腫瘤標(biāo)志物、血清免疫學(xué)。

    用促凝管的優(yōu)點:

、加速紅細胞的凝固,無需長時間的靜置;

、帶有分離膠,有效的將血清分離出來,更好的避免溶血;

    收集血清的缺點:

、需要紅細胞的充分凝固,所需靜置時間較長;

、分離出的血清相對較少,1ml全血不抗凝約只能分離出0.2-0.3ml血清。

二、抗凝收集血漿:

收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接離心分離血漿待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及*。

 

1、肝素抗凝:

zui常用的抗凝劑,一般情況下對相關(guān)指標(biāo)都不會有干擾,同時抗凝比例較大(抗凝劑:

全血=1:30),對血液基本沒有稀釋影響。

肝素是一種含有硫酸基團的粘多糖,帶有強大的負電荷,具有加強抗*III滅活絲

氨酸蛋白酶的作用,從而阻止*的形成,并有阻止血小板聚集等多種抗凝作用。肝素管一般用于生化及血流變的檢測,是電解質(zhì)檢測的*選擇,檢驗血標(biāo)本中的鈉離子時,不能使用*,以免影響檢測結(jié)果。也不能用于白細胞計數(shù)和分類,因肝素會引起白細胞聚集。

盡管用肝素的三種鹽抗凝所得電解質(zhì)濃度無顯著差別,但肝素鋰還是被認為是的。這主要是人們認為*可使鈉的測定值偏高,肝素銨可使血氨測定值偏高(尿素酶法測定

肝素可抑制分子生物學(xué)中常用的一些工具酶,如限制性內(nèi)切酶、Taq酶等,可影響PCR

的實驗結(jié)果。可采用一些方法消除肝素的抑制效應(yīng),如利用肝素酶,或在分離白細胞后用緩沖液洗滌白細胞兩次以上等。然而,許多實驗工作者仍不愿意在進行分子生物學(xué)實驗時采用肝素作抗凝劑。

2、EDTA抗凝:

乙二胺四乙酸是一種氨基多羧基酸,可以有效地鰲合血液中的鈣離子,鰲合鈣會將鈣從

反應(yīng)點移走將阻止和終止內(nèi)源性或外源性凝血過程,從而防止血液凝固,與其他抗凝劑比較而言,其對血球的凝集及血細胞的形態(tài)影響較小,故通常使用EDTA鹽(2K、3K、2Na)作為抗凝劑。用于一般血液學(xué)檢查,不能用于血凝、微量元素及PCR檢查。
    由于EDTA會螯合重金屬離子,用該抗凝劑的話,部分帶有金屬離子的大分子酶都會有大量損失,具體看客戶測定的指標(biāo)來選擇,做血常規(guī)的話必須用EDTA抗凝。

   3、枸櫞酸鹽抗凝:

檸檬酸鈉通過作用于血樣中鈣離子鰲合而起抗凝作用,國家臨床實驗室標(biāo)準化委員會(NCCLS)推薦為3.2或3.8%,抗凝劑與血比例為1:9,主要用于纖溶系統(tǒng)(*原時間、*時間、活化部分*時間、纖維蛋白原)。采血時應(yīng)注意采足血量,以保證檢驗結(jié)果的準確性,采血后應(yīng)立即輕輕顛倒混勻5-8次。由于抗凝比例較?。鼓齽喝?1:9),對血液有一定的稀釋,一般不建議。

選擇抗凝的注意點:

、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

       、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4-0.5ml血漿);

       、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

       血清、血漿收集好后,暫時不測定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中間如*凍融,-20℃以下可保存一個月,-70℃以下可保存三個月。

  

三、收集血清、血漿所用離心轉(zhuǎn)速:

   分離血清或血漿,根據(jù)種屬不同,離心轉(zhuǎn)速也有差異,推薦離心轉(zhuǎn)速為:

       、小鼠:一般1000-1500轉(zhuǎn)/分,離心8-10分鐘;

、大鼠、兔子:一般2000-2500轉(zhuǎn)/分,離心8-10分鐘;

、人:一般2500-3000轉(zhuǎn)/分,離心8-10分鐘。

四、高脂及溶血因素的影響:

溶血的影響:

溶血對某些檢驗指標(biāo)的的影響不僅取決于所采用的方法,也取決于所用的分析儀器。采用雙

波長測定法可在一定程度上消除Hb的顏色干擾,然而Hb的干擾并不能*消除,尤其是當(dāng)Hb可以與采用的試劑發(fā)生作用時??偟膩碚f,輕微的溶血,對大多數(shù)臨床化學(xué)指標(biāo)的測定方法無明顯干擾。嚴重的溶血,可能有兩方面的影響:(1)測定成分在紅細胞內(nèi)的濃度高于血漿時,導(dǎo)致測定結(jié)果偏高;(2)測定成分在RBC內(nèi)濃度低于血漿時,產(chǎn)生輕微的稀釋效應(yīng)。

用肉眼觀察標(biāo)本是否溶血只能是粗略的判斷。只有當(dāng)血清中血紅蛋白濃度超過20mg/dl時,

肉眼才能見到溶血情況。有人報導(dǎo)0.1%的紅細胞發(fā)生溶血后,其血清外觀與非溶血標(biāo)本一致;

1%紅細胞發(fā)生溶血后,血清清亮,呈櫻紅色,這樣的標(biāo)本就代表了中度溶血。

有人建議用血清Hb濃度來對溶血程度進行判斷。非溶血標(biāo)本血清游離Hb4.8±3.2mg/dl,中度溶血血清Hb為43.5±13.9mg/dl。即使輕微的溶血也可能導(dǎo)致相應(yīng)指標(biāo)的測定結(jié)果偏高(如LDH、ACP、K等),這樣的標(biāo)本應(yīng)盡量避免使用。

高脂的影響:

高脂血癥所產(chǎn)生的混濁對某些指標(biāo)測定的影響,同樣取決于所采用的測定方法。一般而言,脂血通過樣品不均一性、水置換、親脂成分的吸收而影響檢驗結(jié)果的準確性。肉眼可見的脂血標(biāo)本可影響總蛋白的測定、電泳及色譜分析等。

五、全血或紅細胞的收集及保存

        測定全血或者是紅細胞中相關(guān)指標(biāo)的話,首先需要收集抗凝全血。

   全血:收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接定量吸取全血,用冷蒸餾水制備溶血液后

用于不同指標(biāo)的檢測;也可定量吸取全血,轉(zhuǎn)入EP管,低溫凍存(溫度越低越好),測定

之前解凍并按比例加入冷蒸餾水制成溶血液用于檢測。

   紅細胞:收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,直接離心吸走血漿,留下層紅細胞,加入3倍

體積的生理鹽水,輕輕顛倒混勻,500~1000轉(zhuǎn)/分,離心5分鐘,棄上清留沉淀紅細胞,

重復(fù)2~3次,至上清液無色為止(洗滌紅細胞)。

        、直接定量吸取紅細胞,按比例加入冷蒸餾水制成溶血液待測;

、定量吸取紅細胞,轉(zhuǎn)入EP管,立即低溫凍存(溫度越低越好),測定之前解凍,并按

比例加入冷蒸餾水制成溶血液用于檢測(解凍后部分紅細胞會破裂,因此樣本冷凍保存之

前必須進行定量)

    溶血液的制備:定量吸取紅細胞或者全血,按比例加入冷蒸餾水,充分漩渦混勻制備溶血液

(對光觀察,溶液澄清透亮,可顯微鏡觀察紅細胞是否破裂,如未破可延長混勻時間),稀釋

成不同濃度用于不同指標(biāo)的檢測。


產(chǎn)品:

肉蓯蓉對照品/標(biāo)準品
*酶(大腸)對照品/標(biāo)準品
反式氯菊酯標(biāo)準品|對照品
松羅酸標(biāo)準品,cas:125-46-2對照品
救必應(yīng)對照品/標(biāo)準品
CAS:482-38-2,山柰苷標(biāo)準品/對照品
杠柳苷元標(biāo)準品,cas:514-39-6對照品
*標(biāo)準品/對照品
*3標(biāo)準品/對照品
CAS:517-89-5,右旋紫草素標(biāo)準品/對照品
*標(biāo)準品/對照品
*標(biāo)準品/對照品
2,3,4-*氧基苯甲酸對照品/標(biāo)準品
CAS:951770-22-2,10 -*醋酸鹽標(biāo)準品/對照品
纖維蛋白溶酶原(牛血)(牛纖溶酶原)對照品/標(biāo)準品
*標(biāo)準品/對照品
CAS:489-35-0,棉花皮素;  棉黃素;  棉花素標(biāo)準品/對照品
6-氨基青霉烷酸對照品/標(biāo)準品
土牛膝標(biāo)準品/對照品
2,4,5-涕酸丁氧基乙酯標(biāo)準品|對照品,cas:2545-59-7
*對照品/標(biāo)準品
苯并[e]芘標(biāo)準品|對照品,cas:192-97-2
茴香醛對照品/標(biāo)準品
CAS:22608-11-3,去甲氧基姜黃素標(biāo)準品/對照品
鬧洋花對照品/標(biāo)準品
大棗標(biāo)準品/對照品
大花紫玉盤醇F標(biāo)準品,cas:176598-10-0對照品
二苯基-(2-氯苯基)甲醇(*雜質(zhì)Ⅰ)對照品/標(biāo)準品
古倫賓對照品/標(biāo)準品
夏佛塔苷對照品/標(biāo)準品
CAS:6877-32-3,柯諾辛標(biāo)準品/對照品
旋覆花內(nèi)酯標(biāo)準品,cas:33620-72-3對照品
*對照品/標(biāo)準品
4-甲氨基*對照品/標(biāo)準品
人參莖葉標(biāo)準品/對照品
CAS:2475-46-9,分散藍3標(biāo)準品/對照品價格
丹蒽醌標(biāo)準品/對照品
木犀草苷對照品/標(biāo)準品
芐草丹標(biāo)準品|對照品,cas:52888-80-9
原皂苷元CP6標(biāo)準品,cas:72629-76-6對照品
紫荊皮對照品/標(biāo)準品
*標(biāo)準品/對照品
濱蒿內(nèi)酯標(biāo)準品/對照品
EPA半揮發(fā)物Mix525標(biāo)準品|對照品
*對照品/標(biāo)準品
氟*標(biāo)準品/對照品
三葉豆紫檀苷標(biāo)準品,cas:6807-83-6對照品
*對照品/標(biāo)準品
*標(biāo)準品/對照品
*對照品/標(biāo)準品
CAS:15401-69-1,小檗紅堿標(biāo)準品/對照品
CAS:5945-50-6,水晶蘭苷標(biāo)準品/對照品
*對照品/標(biāo)準品
CAS:633-66-9,硫酸小檗堿標(biāo)準品/對照品
丹參酮ⅡA磺酸鈉標(biāo)準品/對照品
丹參酚酸B甲酯標(biāo)準品,cas:122021-74-3對照品
砜嘧磺隆標(biāo)準品|對照品,cas:122931-48-0
木瓜(貼梗海棠)對照品/標(biāo)準品
寬葉纈草標(biāo)準品/對照品
*標(biāo)準品/對照品
綠茶(茶葉)對照品/標(biāo)準品
*對照品/標(biāo)準品
CAS:134859-96-4,6''-O-乙酰黃豆黃苷標(biāo)準品/對照品
大麥芽堿標(biāo)準品,cas:539-15-1對照品
5-羥甲基糠醛對照品/標(biāo)準品
番石榴葉標(biāo)準品/對照品
唑螨酯標(biāo)準品|對照品,cas:134098-61-6
*對照品/標(biāo)準品
鹿銜草對照品/標(biāo)準品
己酸二乙氨基乙醇酯(MGK264)標(biāo)準品|對照品,cas:113-48-4
CAS:144-82-1,磺胺甲二唑標(biāo)準品/對照品價格
對甲苯磺酰胺對照品/標(biāo)準品
二氫山芹醇醋酸酯標(biāo)準品,cas:23180-65-6對照品
知母皂苷BⅡ?qū)φ掌?標(biāo)準品
水蘇堿標(biāo)準品,cas:471-87-4對照品
*對照品/標(biāo)準品
鹽酸*對照品/標(biāo)準品
黃豆黃素標(biāo)準品,cas:40957-83-3對照品
N-去甲基蝙蝠葛堿標(biāo)準品,cas:146763-55-5對照品
2''-O-沒食子?;鸾z桃苷標(biāo)準品,cas:53209-27-1對照品
EPA有機揮發(fā)物VOC-Mix2標(biāo)準品|對照品
廣藿香油標(biāo)準品/對照品
*標(biāo)準品|對照品,cas:67-45-8
蟾酥毒基標(biāo)準品,cas:465-39-4對照品
1,4-對苯醌對照品/標(biāo)準品
乙酰吉它霉素標(biāo)準品/對照品
對苯二酚標(biāo)準溶液,cas:123-31-9
Kamebakaurine標(biāo)準品,cas:73981-34-7對照品
碘硫磷標(biāo)準品|對照品,cas:18181-70-9
雙氯芬酸雜質(zhì)A (1-(2,6-二氯苯基)-2-羥吲哚)標(biāo)準品/對照品
1-萘乙酰胺標(biāo)準品|對照品,cas:86-86-2
*對照品/標(biāo)準品
*對照品/標(biāo)準品
L-*對照品/標(biāo)準品
山梨酸鉀對照品/標(biāo)準品
CAS:973-21-7,消螨通標(biāo)準品/對照品價格
毛果天芥菜堿標(biāo)準品,cas:303-34-4對照品
一點紅對照品/標(biāo)準品
4-異丁基苯甲酸(*雜質(zhì))對照品/標(biāo)準品
CAS:466-26-2,雪上一枝蒿乙素標(biāo)準品/對照品

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