一、勻漿介質(zhì)
一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據(jù)樣本及測定指標(biāo)的情況自行設(shè)定濃度,目的是保持樣本的等滲環(huán)境。
二、細(xì)胞樣本的前處理:
1、細(xì)胞沉淀的收集：
① 懸浮細(xì)胞: 對于懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，直接通過離心收集細(xì)胞沉淀，將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘，棄上清留細(xì)胞沉淀。
② 貼壁細(xì)胞: 對于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，用*將細(xì)胞消化下來，或用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下來，將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘，棄上清留細(xì)胞沉淀。
我們一般建議客戶，細(xì)胞密度不要小于一百萬個/ml。
2、細(xì)胞沉淀的洗滌：
在細(xì)胞沉淀中加入0.5-1ml的PBS （等滲）， 輕輕顛倒混勻，將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘，棄上清留細(xì)胞沉淀。
重復(fù)上述操作反復(fù)洗滌1～2次。
3、勻漿的方式：手工勻漿，超聲破碎,裂解液裂解,反復(fù)凍融。
① 手工勻漿：在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據(jù)所測指標(biāo)的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細(xì)胞密度不小于一百萬個/ml），混勻，將細(xì)胞懸浮于PBS中，用移液器將細(xì)胞懸浮液移至玻璃勻漿管中（2ml玻璃勻漿管），將玻璃勻漿管置于冰水混合物中，手動勻漿3分鐘，然后取破碎好的細(xì)胞懸浮液進(jìn)行測定。
② 超聲破碎:
在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據(jù)所測指標(biāo)的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細(xì)胞密度不小于一百萬個/ml），混勻，將細(xì)胞懸浮于PBS中，在冰水浴條件下進(jìn)行如下操作:
a、用超聲粉碎機進(jìn)行粉碎，可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細(xì)胞破碎，也可用國產(chǎn)超聲波發(fā)生儀，用400安培，5秒/次，間隙10秒反復(fù)3～5次。
b、用超聲細(xì)胞破碎儀，300W功率，每次超聲3～5秒，間隔30秒，重復(fù)4～5次。
③ 裂解液裂解
常用裂解液有SDS、NP-40、TritonX-100,這三種去垢劑的作用是不同的，或者說作用力量強弱不同。
1、SDS屬于離子型去垢劑，zui厲害，基本可以把細(xì)胞*破掉，DNA會釋放出來，裂解液變得很粘稠。
2、NP-40是很溫和的去垢劑，1%濃度的基本可以破壞掉胞膜，而對核膜破壞的作用弱，結(jié)合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。
3、TritonX-100的能力介于NP40和SDS之間，偏向于NP40，也是常用的細(xì)胞裂解液成分之一，在保護蛋白活性方面有一定作用（SDS基本會使蛋白變性失活）。
去垢劑屬性只是一方面，buffer、配比、濃度、提取方法和材料處理也都是關(guān)鍵因素
由于很多裂解液都是蛋白變性劑,對酶活力的測定有一定的影響,一般不*用裂解液進(jìn)行裂解。
④ 反復(fù)凍融:
在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據(jù)所測指標(biāo)的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細(xì)胞密度不小于一百萬個/ml），混勻，將細(xì)胞懸浮于PBS中，放低溫冰箱中結(jié)冰，溶解，再結(jié)冰，再溶解，反復(fù)3次左右）。
由于反復(fù)凍融對酶活力影響較大,一般不*使用
產(chǎn)品：
| 吳茱萸次堿標(biāo)準(zhǔn)品,cas:84-26-4對照品 |
| 20(s)-原人參三醇標(biāo)準(zhǔn)品,cas:34080-08-5對照品 |
| 鹽酸*對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| 蛇床子對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| 白果內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| *標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| 馬鞭草標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| CAS:98243-57-3,湖貝甲素標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| CAS:25956-17-6,誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)品/對照品價格 |
| *標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| *標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| 葶藶子(播娘蒿)標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| 去甲蟛蜞菊內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品,cas:6468-55-9對照品 |
| 噻草隆標(biāo)準(zhǔn)品|對照品,cas:1929-88-0 |
| CAS:486-66-8,大豆苷元標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| 阿里紅標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| 甲基丁子香酚標(biāo)準(zhǔn)品,cas:93-15-2對照品 |
| *標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| *對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| 染料木苷標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| CAS:25127-29-1,克班寧標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| 東莨菪內(nèi)酯對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| 鹽酸水蘇堿對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| CAS:1491-41-4,驅(qū)蟲膦標(biāo)準(zhǔn)品/對照品價格 |
| 肉葉蕓香堿標(biāo)準(zhǔn)品,cas:442-51-3對照品 |
| *對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| *標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| *對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| *對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| 茵陳(濱蒿)對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| 巖藻甾醇標(biāo)準(zhǔn)品,cas:17605-67-3對照品 |
| *雜質(zhì)對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| *對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| 蛇床子素對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品,cas:327-97-9對照品 |
| 滿山白對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| CAS:522-97-4,四氫小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| 6-姜辣素對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| 6-巰基嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| CAS:75239-63-3,麥冬二氫高異黃酮A標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| 去亞甲基小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品,cas:25459-91-0對照品 |
| 蟲螨磷標(biāo)準(zhǔn)品|對照品,cas:60238-56-4 |
| CAS:15862-07-4,2,4,5-三氯聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)品/對照品價格 |
| 土荊芥標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| 7-乙基-10-羥基*標(biāo)準(zhǔn)品,cas:86639-52-3對照品 |
| 黃柏堿標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| 烏賊墨標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| *標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| 滅草呋喃標(biāo)準(zhǔn)品|對照品,cas:26225-79-6 |
| 吡嘧磺隆標(biāo)準(zhǔn)品|對照品,cas:98389-04-9 |
| *混合物對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| CAS:78763-58-3,去芹糖桔梗皂苷 D標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| *對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| 乙羧氟草醚標(biāo)準(zhǔn)品|對照品,cas:77501-90-7 |
| 5-｛4-［2-（5-乙基-2-吡啶基）乙氧基］苯基亞甲基｝-2，4-噻唑二酮(鹽酸*雜質(zhì))對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| 石見穿標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| CAS:84954-92-7,洛塞維標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| CAS:52756-25-9,麥草氟甲酯標(biāo)準(zhǔn)品/對照品價格 |
| 苯并(b)熒蒽標(biāo)準(zhǔn)品|對照品,cas:205-99-2 |
| 三白草酮對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| 桑皮苷C標(biāo)準(zhǔn)品,cas:102841-43-0對照品 |
| 香薷對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| 白果內(nèi)酯對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| 雙氯*標(biāo)準(zhǔn)品|對照品,cas:343-55-5 |
| *標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| CAS:34681-10-2,丁酮威標(biāo)準(zhǔn)品/對照品價格 |
| 鎵標(biāo)準(zhǔn)溶液,cas:7440-55-3 |
| *標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| 鹽酸吐根酚堿標(biāo)準(zhǔn)品,cas:5853-29-2對照品 |
| *標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| 鹽酸*標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| 滇桂艾納香標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| 磷酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液 |
| CAS:68786-66-3,三氯苯達(dá)唑標(biāo)準(zhǔn)品/對照品價格 |
| *對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| 耐斯糖對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| 十七碳酸甲酯對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| 反式－九氯標(biāo)準(zhǔn)品|對照品,cas:39765-80-5 |
| 間氨基酚標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| 菜薊苦素標(biāo)準(zhǔn)品,cas:35730-78-0對照品 |
| 3,4-二甲酚標(biāo)準(zhǔn)溶液,cas:95-65-8 |
| *E標(biāo)準(zhǔn)品,cas:18444-66-1對照品 |
| 土荊皮乙酸對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| CAS:127191-86-0,馬兜鈴內(nèi)酰胺 A標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| 白術(shù)對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| (K,Na)多元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（混標(biāo)）標(biāo)準(zhǔn)品|對照品 |
| *對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| CAS:124961-61-1,多被銀蓮花皂苷R8標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| *對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| L-*對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| 異澤蘭黃素標(biāo)準(zhǔn)品,cas:22368-21-4對照品 |
| 亞硫酸氫鈉甲萘醌標(biāo)準(zhǔn)品|對照品,cas:130-37-0 |
| 阿洛西林對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| *對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
| 芥子苷單水合物標(biāo)準(zhǔn)品,cas:64550-88-5對照品 |
| 槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品,cas:6151-25-3對照品 |
| 炔草酯標(biāo)準(zhǔn)品|對照品 |
| CAS:93675-88-8,連翹酯苷E標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
| CAS:144-80-9,*標(biāo)準(zhǔn)品/對照品價格 |
| 香蜂草苷標(biāo)準(zhǔn)品,cas:14259-47-3對照品 |
