本試劑僅供研究使用  標(biāo)本：血清或血漿

人血小板因子4ELISA 檢測試劑盒試驗原理：

PF4試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知PF4濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先將PF4和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中PF4的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料

1． 蒸餾水。

2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

人血小板因子4ELISA 檢測試劑盒操作注意事項

1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

2． 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6． 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

8． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

9． 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法

1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準(zhǔn)備

標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。

1． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8． 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。

局限

6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

試劑盒性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與人其它細胞因子反應(yīng)。

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析

1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的PF4標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的PF4含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測值范圍：0-80ng/ml

4、敏感度： 0.1 ng/ml

14-3-3 family protein  蘋果14-3-3蛋白抗體（植物） X47476  1ml
GLI1/Zfp5  腦膠質(zhì)瘤相關(guān)蛋白抗體（鋅指蛋白5） X47477  0.1ml
Involucrin  囊包蛋白/內(nèi)披蛋白抗體 X47478  0.2ml
human Fibrinogen  羊抗人纖維蛋白原抗體 X47479  0.1ml
S100B/S100 beta  S100B蛋白抗體 X47480  0.2ml
GDF8  生長分化因子8/肌肉抑制素抗體 X47481  0.2ml
2,4-D  2，4-二氯苯氧乙酸（除草劑）抗體 X47482  0.2ml
2,4-D（24D1）  2，4-二氯苯氧乙酸（除草劑）單克隆抗體 X47483  0.1ml
eIF4EBP1/4EBP1  eIF4E結(jié)合蛋白抗體 X47484  0.1ml
phospho-eIF4EBP1/4EBP1（Ser64）  磷酸化4E結(jié)合蛋白1抗體 X47485  0.1ml
phospho-eIF4EBP1（Thr37/46）  磷酸化4E結(jié)合蛋白1抗體 X47486  0.1ml
phospho-eIF4EBP1/4EBP1（Ser65/Thr70）  磷酸化eIF4E結(jié)合蛋白抗體 X47487  0.1ml
phospho-EIF4EBP1（Ser100）  磷酸化eIF4E結(jié)合蛋白抗體 X47488  0.1ml
phospho-EIF4EBP1（Ser111）  磷酸化eIF4E結(jié)合蛋白抗體 X47489  0.1ml
EIF5  真核翻譯起始因子5抗體 X47490  0.2ml
4EBP2  eIF4E結(jié)合蛋白2抗體 X47491  0.1ml
Cytokeratin 5/CK5人血小板因子4ELISA 檢測試劑盒  細胞角蛋白5抗體 X47492  0.1ml
5-HT  5-羥色胺抗體 X47493  0.1ml
HRPT2/CDC73/Parafibromin  甲狀旁腺功能亢進蛋白2抗體（細胞分裂周期73） X47494  0.2ml
5-HTR1A  5-羥色胺受體1A抗體 X47495  0.1ml
THOC2  轉(zhuǎn)錄因子THOC2抗體 X47496  0.2ml
VEGF  血管內(nèi)皮生長因子抗體 X47497  0.1ml
DNA Ligase IV/LIG4  DNA連接酶4抗體 X47498  0.2ml
5-HTR1B  5-羥色胺受體1B抗體 X47499  0.1ml
5-HTR2B  5-羥色胺受體2B抗體 X47500  0.1ml
5-HTR2A  5-羥色胺受體2A抗體 X47501  0.1ml
5-HTT  5-羥色胺轉(zhuǎn)運蛋白抗體 X47502  0.1ml
5-HTR3  5-羥色胺受體3抗體 X47503  0.1ml