我公司所代理的ELISA試劑盒是美國RD的，還有國產(chǎn)的，質(zhì)量肯定是可以保證的，我們還提供全程指導(dǎo)，我們今天來看的實(shí)驗(yàn)就是有關(guān)于ELISA試劑盒方法，下面來看看讓我們使用ELISA試劑盒法來檢驗(yàn)噬菌體抗體與目的抗原的親和力。

操作實(shí)驗(yàn)的十四個(gè)步驟：
1、將抗原用PBS或0.5mol/L Na2CO3(pH9.6)稀釋至10μg/ml;
2、對(duì)于要檢測(cè)的每個(gè)克隆,至少包被2個(gè)孔,每孔用200μl稀釋抗原。同時(shí)包被陰性對(duì)照抗原。此外,包被陽性對(duì)照抗原,陽性對(duì)照抗原用anti-M13抗體;
3、室溫包被1～2h,于4℃過夜包被,甩掉孔中液體,倒置于紙巾上空干。
4、每孔中用至少200μl 1%BSA封閉,37℃1h。去掉液體后空干。
5、將重組噬菌體事先用等體積的封閉液于室溫下封閉15min～30min,ELISA試劑盒以封閉各種蛋白質(zhì)之間的非特異性結(jié)合位點(diǎn)。
6、在每個(gè)包被抗原孔中,加入稀釋的重組噬菌體懸液200μl,37℃ 1～2h。在包被了陽性對(duì)照抗原的孔中,加入200μl陽性對(duì)照噬菌體。
7、去掉孔中液體,倒置于紙巾上。將板浸入PBS/0.5% Tween20(PBST)中,振蕩趕走氣泡,將板取出。重復(fù)洗滌5遍。
8、將板倒置于紙巾上,去掉所有液體。
9、將HRP酶標(biāo)的Anti-M13抗體用封閉緩沖液稀釋至合適濃度。
10、在每孔中加入200μl HRP/Anti-M13稀釋液。
11、37℃溫育1h。按前述方法洗滌6次。
12、每21ml 1×ABTS底物溶液中加入36μl 30% H2O2。在每孔中加入200μl。
13、置室溫20～60min,直至出現(xiàn)適中的顏色反應(yīng)。加入2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
14、于415nm波長(zhǎng)下用酶標(biāo)儀讀出光吸收值。良好的數(shù)據(jù)中,噬菌體抗體與篩選抗原的吸收值應(yīng)當(dāng)比陰性對(duì)照抗原的吸收值高2～3倍。
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