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閱讀：413發(fā)布時間：2012-8-6
液相色譜儀測定氨基酸的含量
1 L--*含量的測定
1.1 實驗儀器與試劑
*樣品，甲醇， STI501液相色譜儀梯度系統(tǒng)，UV501紫外檢測器，7725I手動進(jìn)樣閥，N2000色譜工作站，0.03%KH2PO4溶液
1.2 HPLC色譜分析條件
流動相為0.03%KH2PO4溶液（A）-甲醇（B），線性梯度淋洗，流速1.0mL/min，柱溫 35℃，檢測波長276nm。
流動相 時間（t/min）
5 10 15 20
A（%） 80 90 80 70
B（%） 20 10 20 30
1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
精密稱取*標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品50mg，置100ml容量瓶中，振搖，用流動相溶解到刻度，作為供試品溶液，另取*樣品適量，同法操作。
1.4 標(biāo)準(zhǔn)直線的制作
精密稱取*標(biāo)準(zhǔn)樣品適量 ,分別稀釋制成每1ml 中含*50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液，注入液相色譜儀，以*峰面積A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，制作回歸標(biāo)準(zhǔn)直線。
1.5 發(fā)酵液中樣品中*含量的測定
取發(fā)酵液，稀釋配制成約 500μg/ ml 的溶液，搖勻，過濾，取25μl進(jìn)樣，在液相色譜儀下測量，記錄峰值面積，作圖。
2 L-*含量的測定
2.1 實驗儀器與試劑
L-*標(biāo)準(zhǔn)樣品，乙腈， STI501液相色譜儀梯度系統(tǒng)，UV501紫外檢測器，7725I手動進(jìn)樣閥，N2000色譜工作站，磷酸二氫銨。
PH計，磷酸，
2.2 HPLC色譜分析條件
流動相: 以磷酸二氫銨溶液 （ 稱取磷酸二氫銨1.15g, 加水800m溶解后, 用磷酸調(diào)節(jié)pH 值至2.0±0.1, 加水稀釋至 1000ml ） - 乙腈為流動相，線性梯度淋洗; 柱溫為30℃檢測波長為206nm；進(jìn)樣量：25μl。
2.3 標(biāo)準(zhǔn)直線的制作
精密稱取*標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品50mg，置100ml 容量瓶中，振搖，用流動相溶解到刻度，作為供試品溶液，另取*樣品適量，同法操作。精密稱取*標(biāo)準(zhǔn)樣品適量 ,分別稀釋制成每1ml 中含*50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液，注入液相色譜儀，以*峰面積A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，制作回歸標(biāo)準(zhǔn)直線。
2.4 發(fā)酵液中樣品中*含量的測定
取發(fā)酵液，稀釋配制成約 500μg/ ml 的溶液，搖勻，過濾，取25μl 進(jìn)樣，在液相色譜儀下測量，記錄峰值面積，作圖。
3 L-*含量的測定
3.1 實驗儀器和試劑
乙酸銨溶液；乙腈；L-*標(biāo)準(zhǔn)樣品； STI501液相色譜儀梯度系統(tǒng)，UV501紫外檢測器，7725I手動進(jìn)樣閥，N2000色譜工作站。
3.2 ＨＰＬＣ色譜分析條件
流動相:A為0.02%mol/L乙酸銨溶液（PH=6.5）:B為乙腈，線性梯度淋洗；流速: 110 mL/min ；柱溫:30℃；進(jìn)樣量:２0μL。
梯度洗脫表3
流動相 時間（t/min）
10 20 30 40 50 60
A（%） 80 60 40 40 60 80
B（%） 20 40 60 60 40 20
3.3 標(biāo)準(zhǔn)直線的制作
方法同2.2節(jié)
3.4 發(fā)酵液中樣品中*含量的測定
方法同2.5節(jié)
4 L-*含量的測定
4.1 實驗儀器和試劑
L-*標(biāo)準(zhǔn)樣品；甲醇；醋酸鈉； STI501液相色譜儀梯度系統(tǒng)，UV501紫外檢測器，7725I手動進(jìn)樣閥，N2000色譜工作站。
4.2 HPLC色譜分析條件
流動相: A為甲醇 , B為 50 mmol /L的醋酸鈉緩沖溶液;流速1 . 0 mL /min;梯度洗脫見表1，測定波長為 262 nm，柱溫為30℃。
梯度洗脫表4
流動相 時間（t/min）
10 20 30 40 50 60
A（%） 30 50 80 85 100 100
B（%） 70 50 20 15 0 0
4.3 標(biāo)準(zhǔn)直線的制作
方法同2.2節(jié)
4.4 發(fā)酵液中樣品中*含量的測定
方法同2.5節(jié)
5 回收率實驗
稱取*標(biāo)準(zhǔn)液50μg/ml分別稀釋0、1、2、4、6、8、10倍，每份取1ml，按標(biāo)準(zhǔn)樣品處理方法，過濾，測定標(biāo)準(zhǔn)樣品中的*的含量，計算回收率。
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