細(xì)胞凋亡－DNA Ladder抽提試劑盒
產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝
C0007 細(xì)胞凋亡-DNA Ladder 抽提試劑盒 50次
產(chǎn)品簡介：
?瑞齊生產(chǎn)的細(xì)胞凋亡－DNA Ladder抽提試劑盒，是針對細(xì)胞凋亡過程中產(chǎn)生的核小體間DNA鏈斷裂而設(shè)計的。可以非
常有效地抽提zui小片斷為180-200bp的DNA ladder，同時又可以抽提到50kb以上的基因組DNA。
?DNA ladder也稱DNA fragmentation，是細(xì)胞凋亡的一個重要指標(biāo)。通常觀察到DNA ladder，就可以判定細(xì)胞發(fā)生了凋亡。
?本試劑盒足夠抽提50個細(xì)胞或組織樣品。
包裝清單：
產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝
C0007-1 樣品裂解液 30ml
C0007-2 蛋白酶K 130μl
C0007-3 10M 醋酸銨 6ml
C0007-4 TE 6ml
— 說明書 1份
保存條件：
-20℃保存，一年有效。10M 醋酸銨和TE也可以室溫保存。
注意事項：
?需自備Tris平衡*、氯仿和無水乙醇。
?為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 樣品收集
a） 對于組織樣品：
切下組織，并剪切成小塊，置液氮中凍結(jié)，研碎或搗碎?；蛑苯颖∩蟿驖{。
b） 對于貼壁細(xì)胞：
*消化后，PBS或生理鹽水洗一次，1000-2000g離心1-2分鐘，棄上清，收集細(xì)胞。
c） 對于懸浮細(xì)胞：
1000-2000g離心1-2分鐘，棄上清，收集細(xì)胞。
2. DNA ladder抽提
a） 每1毫升樣品裂解液中加入5微升蛋白酶K，混勻。
b） 對于上述收集好的樣品，每5毫克組織或者106個細(xì)胞中加入500微升添加了蛋白酶K的樣品裂解液，Vortex混勻，充分
裂解組織或細(xì)胞。
c） 50℃水浴消化過夜（通常12-20小時皆可）。
d） 加入500微升Tris平衡*。
e） Vortex劇烈混勻，使有機(jī)相和水相充分混合，以達(dá)到抽提效果。4℃，12,000g離心5分鐘。
f） 緩慢吸出酚相及中間相（可以吸除少量靠近中間相的水相液體），剩余的水相用等體積Tris平衡酚再抽提一次（同步驟
e）。
g） 緩慢吸出酚相及中間相（可以吸除少量靠近中間相的水相液體），剩余的水相用等體積氯仿再抽提一次（同步驟e）。
h） 慢慢吸出約300微升上清液，加入60微升10M醋酸銨和600微升無水乙醇，顛倒數(shù)次混勻，此時可見DNA沉淀產(chǎn)生。-
20℃凍存1小時，以充分沉淀小片斷DNA。凍存過夜或-70℃凍存效果更佳。
i） 4℃，12, 000g 離心10分鐘，棄上清。
j） 加入600微升70%乙醇，輕輕顛倒約2次。4℃，12, 000g 離心10分鐘，小心吸去上清。注意：70%乙醇洗滌的時候，
千萬注意避免損失一些細(xì)小的DNA沉淀，這些沉淀中大部分是你所需的DNA ladder。
k） 盡量吸除殘余的乙醇，待看不到明顯的液體時，立即加入50-100微升TE溶解DNA。注意：不可過分干燥基因組DNA
沉淀，否則會極難溶解。如果發(fā)現(xiàn)DNA沉淀難以溶解，可以在4℃用搖床緩慢搖動過夜，以溶解DNA沉淀。
l） 取部分抽提得到的DNA，1%瓊脂糖凝膠電泳分析。如果細(xì)胞發(fā)生凋亡，就可以觀察到典型的DNA ladder。電泳時一
定要注意換用新鮮配制的電泳液，DNA凝膠也要用新鮮配制的電泳液配制并新鮮配制后使用。電泳時為獲取*的
電泳效果使ladder充分分開，電泳速度宜適當(dāng)慢一些，凝膠宜適當(dāng)長一些，而加樣孔宜更加扁平一些。選取適當(dāng)較薄
的梳齒，往往會獲得更好的ladder電泳效果。
使用本產(chǎn)品的文獻(xiàn)：
1. Wang N, Hou L, Zhu ZY, Zhang JY, Ju CX, Ge YL, Yue W.
Effect of 2, 3-dioxo indoline on apoptosis and human omera se reverse transcr ipta se mRNA in SH2SY5Y cells.
Chinese Pharm acological B ulletin. 2007 May;23（5）:680～4.
2. Qian YF, Wang H, Yao WB, Gao XD.
Aqueous extract of the Chinese medicine, Danggui-Shaoyao-San, inhibits apoptosis in hydrogen peroxide-induced PC12 cells by preventing cytochrome c
release and inactivating of caspase cascade.
Cell Biol Int. 2008 Feb;32（2）:304-11.
3. Bai Y, Li Q, Yang J, Zhou X, Yin X, Zhao D.
p75（NTR） activation of NF-kappaB is involved in PrP106-126-induced apoptosis in mouse neuroblastoma cells.
Neurosci Res. 2008 Sep;62（1）:9-14. Epub 2008 May 23.
4. Cai L, Wang H, Li Q, Qian Y, Yao W.
Salidroside inhibits H2O2-induced apoptosis in PC12 cells by preventing cytochrome c release and inactivating of caspase cascade.
Acta Biochim Biophys Sin （Shanghai）. 2008;40（9）:796-802.
5. Wang H, Xu Y, Yan J, Zhao X, Sun X, Zhang Y, Guo J, Zhu C.
Acteoside protects human neuroblastoma SH-SY5Y cells against beta-amyloid-induced cell injury.
Brain Res. 2009 Aug 4;1283:139-47. Epub 2009 Jun 9.
6. Chai J, Xiong Q, Zhang P, Zheng R, Peng J, Jiang S.
Induction of Ca2+ signal mediated apoptosis and alteration of IP3R1 and SERCA1 expression levels by stress hormone in differentiating C2C12 myoblasts.
Gen Comp Endocrinol. 2010;166（2）:241-9. Epub 2009 Aug 31.
7. Li J, Xu Z, Tan M, Su W, Gong XG.
3-（4-（Benzo[d]thiazol-2-yl）-1-phenyl-1H-pyrazol-3-yl） phenyl acetate induced Hep G2 cell apoptosis through a ROS-mediated pathway.
Chem Biol Interact. 2010 Feb 12;183（3）:341-8. Epub 2009 Dec 16.
