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技術(shù)文章

FACS分析檢測(cè)跨膜型腫瘤壞死因子（TNF）

閱讀：531發(fā)布時(shí)間：2012-7-28

以下簡(jiǎn)單介紹用FACS分析檢測(cè)跨膜型TNF。

1．材料
①含2％人血清，0．1％疊氮鈉的PBS；
②FITC標(biāo)記的TNF單克隆抗體；
③羊或兔抗TNF多克隆抗體及F1TC標(biāo)記的羊抗兔IzC。

2．操作步驟
（1）單核細(xì)胞加或不加激活劑，37℃培養(yǎng)一定時(shí)間。
（2）2000rpm離心10min，棄上清。
（3）用含2％人血清／0．1％疊氮鈉的PBS懸浮細(xì)胞。
（4）將105細(xì)胞廳L0口人圓底96孔培養(yǎng)板，并加FITC標(biāo)記的TNF單抗冰上放置20min。如無FITC標(biāo)記的TNF單抗，可按（5）～（7）步驟操作。
（5）加1：500稀釋的兔抗TNF多抗，冰上放置20min。
（6）用PBS洗一次，以去除未結(jié)合的抗體。
（7）再加1：500稀釋的FITC標(biāo)記的羊抗兔ISC，置冰上20min。
（8）PBS洗4次后，用流式細(xì)胞儀分析熒光標(biāo)記陽性細(xì)胞百分率及平均熒光強(qiáng)度。


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