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技術(shù)文章

56kD核蛋白抗體自身抗原

閱讀:758發(fā)布時間:2012-8-4

l.定義 56kD蛋白是大核糖核酸蛋白(InRNP)顆粒的成分之一。hRNP中的主要成分是富含脲嘧啶的小核糖核酸(snRNP),如U1、U2、U4/U6及U5snRNPs,其相應(yīng)的自身抗體見于一些自身免疫性疾病。56kD蛋白序列是高度保守的、存在于轉(zhuǎn)錄、合成活躍的各種組織細胞中。

2.來源 由于細胞內(nèi)存在大量豐富的InRNP顆粒,因而56kD蛋白來源豐富。以細胞核提取物進行蛋白質(zhì)印跡(免疫印跡),可檢測到肌炎患者血清中的56kD抗體。一些肌炎患者血清中通常僅含56kD抗體。

3.純化方法 采用免疫親和層析,可從富含InRNP的Hela細胞、Hep—2細胞核等提取物中純化56kD蛋白。用于純化56kD抗原的自身抗體可從56kD抗體陽性血清中制備。簡要的步驟是用飽和硫酸銨沉淀血清蛋白,過DE52層析柱,獲得的IgG與Sepharose 4B偶聯(lián)制成親和層析柱。核提取物溶于10mM Tris HCl pH7.9,0.5M NaCl,2mMPMSF中,上柱并用上述緩沖液充分洗滌,zui后改用0.2M醋酸洗脫蛋白,用1MK2HP04中和獲得的蛋白,用蛋白質(zhì)印跡法鑒定。
 


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