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技術(shù)文章

提取干血斑中的DNA樣本

閱讀：469發(fā)布時(shí)間：2017-8-23

DNA提取需在II級(jí)生物安全柜內(nèi)完成 
1.用打孔器將6mm直徑大小的DBS打入1.5ml的離心管中，用燒灼和酒精搽拭的方法消毒打孔器頭部。 
2.每個(gè)離心管中加入1ml去離子水，渦旋10秒，在管壁外側(cè)做離心方向標(biāo)記； 
3.將離心管置于搖床上，轉(zhuǎn)速500-600轉(zhuǎn)/分，室溫，搖動(dòng)15分鐘； 
4.室溫下，離心管12500×g，離心3分鐘； 
5.小心從離心管中吸去上清約950μl去離子水，留50μl于管中； 
6.重復(fù)2-5步； 
7.每管中加入新鮮配置的10% Chelex100 Resin 150μl（0.1克Resin / 1ml去離子水），渦旋混勻10秒； 
8.室溫下，離心管12500×g，離心3分鐘； 
9.水浴箱中56℃，溫育2小時(shí)； 
10.取出離心管輕輕振蕩； 
11.放入100℃開(kāi)水中煮沸8分鐘； 
12. 室溫下，離心管12500×g，離心3分鐘； 
13.立即小心吸取100-120μl上清（應(yīng)避免吸到Chelex100樹(shù)脂，其對(duì)PCR有抑制作用）于干凈的管中； 
14.放于-20℃保存。 
 


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