丙二醛(MDA)是常用的膜脂過氧化指標(biāo)，在酸性和高溫度條件下，可以與硫代*酸(TBA)反應(yīng)生成紅棕色的*川(3，5，5—*基惡唑-2，4。二酮)，其zui大吸收波長在532nm。但是測定植物組織中MDA時受多種物質(zhì)的干擾，其中zui主要的是可溶性糖，糖與TBA顯色反應(yīng)產(chǎn)物的zui大吸收波長在450nm，但532nm處也有吸收。
植物器官衰老或在逆境下遭受傷害，往往發(fā)生膜脂過氧化作用，丙二醛(MDA)是膜脂過氧化的zui終分解產(chǎn)物，其含量可以反映植物遭受逆境傷害的程度。MDA從膜上產(chǎn)生的位置釋放出后，可以與蛋白質(zhì)、核酸反應(yīng)，從而喪失功能，還可使纖維素分子間的橋鍵松馳，或抑制蛋白質(zhì)的合成。因此，MDA的積累可能對膜和細(xì)胞造成一定的傷害。
[原 理]
丙二醛(MDA)是常用的膜脂過氧化指標(biāo)，在酸性和高溫度條件下，可以與硫代*酸(TBA)反應(yīng)生成紅棕色的*川(3，5，5—*基惡唑-2，4。二酮)，其zui大吸收波長在532nm。但是測定植物組織中MDA時受多種物質(zhì)的干擾，其中zui主要的是可溶性糖，糖與TBA顯色反應(yīng)產(chǎn)物的zui大吸收波長在450nm，但532nm處也有吸收。植物遭受干旱、高溫、低溫等逆境脅迫時可溶性糖增加，因此測定植物組織中MDA—TBA反應(yīng)物質(zhì)含量時一定要排除可溶性糖的干擾。低濃度的鐵離子能夠顯著增加TBA與蔗糖或MDA顯色反應(yīng)物在532、450nm處的消光度值，所以在蔗糖、MDA與TBA顯色反應(yīng)中需一定量的鐵離子，通常植物組織中鐵離子的含量為每克千重100—300ug·g-1，根據(jù)植物樣品量和提取液的體積，加入Fe3+的終濃度為0．5umol·L-1。
1．直線回歸法 MDA與TBA顯色反應(yīng)產(chǎn)物在450nm波長下的消光度值為零。不同濃度的蔗糖(0—25mmol·L-1)與TBA顯色反應(yīng)產(chǎn)物在450nm的消光度值與532nm和600nm處的消光度值之差成正相關(guān)，配制一系列濃度的蔗糖與TBA顯色反應(yīng)后，測定上述三個波長的消光度值，求其直線方程，可求算糖分在532nm處的消光度值。UV-120型紫外可見分光光度計的直線方程為：
Y532＝—0．O0l98十0．088D450(44—1)
2．雙組分分光光度計法 據(jù)朗伯一比爾定律：D＝kCL，當(dāng)液層厚度為1cm時，kD／C，
k稱為該物質(zhì)的比吸收系數(shù)。當(dāng)某一溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì)時，某一波長下的消光度值等于此混合液在該波長下各顯色物質(zhì)的消光度之和。
已知蔗糖與TBA顯色反應(yīng)產(chǎn)物在450nm和532nm波長下的比吸收系數(shù)分別為85．40、
7．40。 MDA在450nm波長下無吸收，故該波長的比吸收系數(shù)為0，532nm波長下的比吸
系數(shù)為155，根據(jù)雙組分分光度計法建立方程組，求解方程得計算公式：
式中
C1＝11．71D450
C2＝6．45(D532—D600)--0.56D450
C1——可溶性糖的濃度(mmol·L-1)
C2----MDA的濃度（·umol·L-1）
D450、0532、D600分別代表450、532和600nm波長下的消光度值。
[儀器設(shè)備]
紫外可見分光光度計1臺；離心機(jī)1臺；電子天平1臺；10ml離心管4支；研缽2套；試管4支；刻度吸管：10ml1支，2ml1支；剪刀1把。
[試劑]
10％三氯乙酸(TCA)；
0．6％硫代*酸：先加少量的氫氧化鈉(1mol·L-1)溶解，再用10％的三氯乙酸定容；
石英砂。
[方法]
1．實驗材料 受干旱、高溫、低溫等逆境脅迫的植物葉片或衰老的植物器官。
2．MDA的提取 稱取剪碎的試材1g，加入2mll0％TCA和少量石英砂，研磨至勻漿，
再加8mlTCA進(jìn)一步研磨，勻漿在4000r·min-1離心10min，上清液為樣品提取液。
3．顯色反應(yīng)和測定 吸取離心的上清液2ml(對照加2ml蒸餾水)，加入2ml 0．6％TBA溶液，混勻物于沸水浴上反應(yīng)15min，迅速冷卻后再離心。取上清液測定532、600和450nm波長下的消光度。
4．計算含量
(1)直線方程法 按公式44-1求出樣品中糖分在532nm處的消光度值Y532，用實測532nm的消光度值減去6nm非特異吸收的消光度值再減去Y532，其差值為測定樣品中MDA—TBA反應(yīng)產(chǎn)物在532nm的消光度值。按MDA在532nm處的毫摩爾消光系數(shù)為155換算求出提取液中MDA濃度。
(2)雙組分分光光度法 按公式44-3可直接求得植物樣品提取液中MDA的濃度。 用上述任一方法求得MDA的濃度，根據(jù)植物組織的重量計算測定樣品中MDA的含量。： MDA含量(umol·g-1)＝MDA濃度(umol·L-1)x提取液體積(ml)／植物組織鮮重(g) (44—4)
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