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技術(shù)文章

溶解細(xì)菌細(xì)胞壁之*的測(cè)定

閱讀:1555發(fā)布時(shí)間:2011-6-14

*為正常機(jī)體免疫防御機(jī)制的組成部分,因具有溶解細(xì)菌細(xì)胞壁的作用而得名。在人體內(nèi),它存在于嗜中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞內(nèi);也存在于粘膜分泌液中,成為體表防御因素之一。體內(nèi)多數(shù)器官含有一定濃度的*,但腎臟和脾臟的含量較多。單核細(xì)胞與巨噬細(xì)胞的*位于細(xì)胞表面,故其釋放活躍,而嗜中性粒細(xì)胞的*位于胞漿深層,只在細(xì)胞裂解時(shí)才釋放出來。正常人尿中無*。某些疾病患者血清或體液內(nèi)的*活性值有顯著差別,故測(cè)定*日益受到臨床重視。

1.原理 根據(jù)*能使革蘭陽性菌細(xì)胞壁溶解,尤其是對(duì)腐生菌,如溶壁微球菌(M.1ysodeikticus)zui為敏感,故常以溶解溶壁微球菌為指標(biāo),對(duì)*的活性值進(jìn)行測(cè)定。常用的方法有瓊脂平板法與比濁法。新近還根據(jù)免疫擴(kuò)散法中抗原抗體反應(yīng)的原理而建立了*免疫測(cè)定法,由測(cè)酶活性改測(cè)酶含量,初步探討認(rèn)為此法具有特異、靈敏、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。現(xiàn)將三種方法分別介紹如下。

2.實(shí)驗(yàn)方法
(1)瓊脂平板法 用0.067mol/L,pH6.4 PBS將瓊脂配成1%濃度,加溫溶解后加50mg/100mL溶壁微球菌菌粉混合制成平皿,凝固后打成直徑2mm的小孔。分別加*標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液及標(biāo)本20gL,置37℃擴(kuò)散18h,用卡尺測(cè)溶菌區(qū)域直徑,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)液濃度和溶菌環(huán)直徑用半對(duì)數(shù)表制成檢量線,查標(biāo)準(zhǔn)曲線求檢品*活性值。

(2)比濁測(cè)定法 取*標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(5、10、15、20、50ug/mL)及標(biāo)本各0.1mL分加至試管,每管加基質(zhì)液6mL(溶壁微球菌基質(zhì)液240mg/L)混勻,置37℃水浴10min,立即混懸,用600mn波長(zhǎng)測(cè)A值,以溶壁微球菌濁度的變化在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出*的活性
值。

(3)免疫測(cè)定法 ①免疫單擴(kuò)散板制備:將單價(jià)特異性兔抗人*抗體加入1%瓊脂糖液中(50℃),制成含5%抗血清凝膠板,用打孔器打成直徑為3mm的小孔,當(dāng)天使用;②*免疫測(cè)定:將10btL標(biāo)本加于免疫擴(kuò)散板的小孔中,保持濕度在室溫下反應(yīng),當(dāng)沉淀環(huán)達(dá)zui大限度后,用帶測(cè)微計(jì)的放大鏡讀其直徑,以直徑的平方在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出*的相應(yīng)濃度;③標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:取*lmg溶于0.05mol/L,pH6.4PBSlmL中,配制成5、10、20、40、80、100、200、300/lS/mL 8種濃度,分別加人免疫擴(kuò)散板小孔中,經(jīng)反應(yīng)后,以沉淀環(huán)直徑的平方為橫坐標(biāo),*濃度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.正常參考值與臨床意義 正常人尿液和腦脊液(CSF)中*為0;血清中*正常參考值:比濁法為11.80±2.2mz/L;平板法為20.40±2.70mg/L;免疫測(cè)定法為10—40mz/L(X±2S)。由于方法與實(shí)驗(yàn)條件不同,測(cè)定結(jié)果有差別,故各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的正常參考值。

血清*測(cè)定對(duì)鑒別各型急性白血病有一定意義。急粒及急單血清*升高;而急淋、急性紅白血病降低或正常;經(jīng)*奏效病情緩解后,*水平可恢復(fù)。血清*測(cè)定可作為判斷局限性腸炎活動(dòng)性的一個(gè)有用的指標(biāo),并且有助于判斷臨床過程的嚴(yán)重程度和對(duì)治療的反應(yīng)。

尿內(nèi)*含量增高的原因有:①腎小管損害;②高*血癥;③腎組織破壞。臨床上測(cè)定尿*主要是作為腎小管損害的一個(gè)指標(biāo),各種原因的腎小管損害都可引起尿*含量增高。腎移植病人定期檢查尿*活性十分必要,如移植腎接受良好,則*活性在7d內(nèi)恢復(fù)正常;若尿中過多的*持續(xù)存在,必須疑及排斥反應(yīng)的發(fā)生。

細(xì)菌性腦膜炎患者CSF*含量遠(yuǎn)較病毒性腦膜炎患者的含量高,因此,CSF*測(cè)定對(duì)二者的鑒別有重要意義。此外,CSF*測(cè)定對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的原發(fā)性或繼發(fā)性腫瘤有一定輔助診斷價(jià)值。


 


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