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技術(shù)文章

急性反應(yīng)期蛋白的測(cè)定

閱讀:888發(fā)布時(shí)間:2011-6-18

受病毒或細(xì)菌感染、貫通傷或鈍挫傷、梗塞、免疫復(fù)合物沉著及針對(duì)組織的自身抗體形成等因素影響,都可導(dǎo)致組織損傷。在組織損傷急性期,機(jī)體除表現(xiàn)出損傷局部的炎癥反應(yīng)外,也常出現(xiàn)一些全身反應(yīng),如肝臟合成某些血漿蛋白顯著增加。因此,急性反應(yīng)期蛋白(acutephasicprotein,APP)是一組被稱為“損傷誘發(fā)的肝臟產(chǎn)生的血清糖蛋白”,在組織損傷后迅速增加,并隨損傷的恢復(fù)而下降,APP種類較多。臨床上常用的是C反應(yīng)蛋白(C-reactiveprotein,CRP)、01酸性糖蛋白(ol—acid glucoprotein,o廠AGP),α1抗*(α1antitrypsin,α1AT),觸珠蛋白(haptozlobin,HP),銅藍(lán)蛋白(cemloplasmin,CP)等。新近發(fā)現(xiàn),脂蛋白α(LPα)是一種zui敏感的急性時(shí)相蛋白,是一種比其他急性期反應(yīng)蛋白更為敏感的炎癥標(biāo)志蛋白。

CRP是zui早發(fā)現(xiàn)的一種急性反應(yīng)期蛋白,在炎癥或組織破壞時(shí)明顯升高,在炎癥開始48h即可達(dá)到峰值,甚至可升高3 000倍。CRP這一特性在臨床上具有非常重要的意義,特介紹如下。

檢測(cè)CRP方法很多,敏感度高的如RIA、發(fā)光免疫測(cè)定(LIA)、ELISA法和熒光偏振免疫分析法等,并可用于定量檢測(cè)。膠乳凝集試驗(yàn)與速率散射濁度法比較,具有高敏感性(97.7%)、特異性(98.04%)和準(zhǔn)確性(98%),且簡(jiǎn)易、經(jīng)濟(jì)、快速,雖為定性試驗(yàn),但可用滴度測(cè)定進(jìn)一步得到半定量的結(jié)果。以下介紹易于推廣、敏感度高、可作定量測(cè)定的ELISA法,以及簡(jiǎn)便易行的半定量膠乳凝集試驗(yàn)。

(一)ELISA法
1.操作步驟
(1)用zui適濃度抗CRP抗體包被聚苯乙烯微量板,每孔0。lmL,37~C1h后,4~C過夜。
(2)用洗滌液洗滌3次,每次3min(以下同)。
(3)于包被抗體孔中加稀釋待測(cè)血清(1:5~1:10),每孔0.1mL,37T:2h,洗3次。
(4)各孔加HRP標(biāo)記抗人CRP抗體各0.1mL,37~C2h,洗3次。
(5)各孔加底物溶液(OPD-H202)0。1mL,37T:反應(yīng)30min。加2mol/LH2S040.05mL,終止反應(yīng)。
(6)每塊反應(yīng)板上均應(yīng)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照。將CRP標(biāo)準(zhǔn)參考品稀釋成不同濃度后與待測(cè)血清同法進(jìn)行測(cè)定,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(7)于酶標(biāo)儀上測(cè)492mn吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線換算得待測(cè)血清中CRP含量。
2.正常參考值 ELISA法測(cè)得正常血清CRP含量為0.07—8。2rog/L;孕婦血清正常
上限為46.8m6/Lo由于測(cè)定方法的敏感度不同,所以CBP的正常值范圍也不相同。

(二)膠乳凝集半定量試驗(yàn)
1.原理 血清標(biāo)本與用抗CttP血清致敏的膠乳混和,如標(biāo)本中含有足量CRP,即出現(xiàn)乳的凝集。用不同稀釋度的血清標(biāo)本進(jìn)行試驗(yàn),可以判斷不同程度的陽性反應(yīng),從而可以達(dá)到半定量的目的。
2.操作步驟
(1)用*緩沖鹽水將受檢血清作1:2,1:4,1:8,1:16,1:32,1:64倍比稀釋。
(2)用毛細(xì)吸管將各種稀釋度的血清各加一滴于反應(yīng)板的一系列格子中。
(3)分別加一滴ClIP膠乳試劑,用小攪棒或牙簽從zui高稀釋血清開始,分別混合每一格的液體。
(4)慢慢搖動(dòng)玻板1—2min,肉眼觀察,出現(xiàn)凝集者為陽性反應(yīng)。顯示凝集的zui高稀釋度即為標(biāo)本的CRP滴度。
3.臨床意義 在細(xì)菌性炎癥中CRP顯著升高,病毒感染時(shí)CRP水平幾乎無變化,因此,CRP常用于細(xì)菌性與非細(xì)菌性腦膜炎的鑒別診斷,并先于細(xì)菌培養(yǎng)得出結(jié)果。SLE患者易繼發(fā)感染,其臨床表現(xiàn)與SLE疾病時(shí)相似,血清CRP在SLE活動(dòng)時(shí)無顯著變化,但繼發(fā)感染時(shí)明顯升高,對(duì)兩者的鑒別診斷有重要意義。風(fēng)濕熱在急性炎癥期CRP幾乎總是升高的,但在非活動(dòng)期ORP降低,因此可用來監(jiān)測(cè)該病的活動(dòng)性。絕大部分急性心肌梗死病人均伴有CRP顯著升高,且在所有急性反應(yīng)期蛋白中,CRP升高出現(xiàn)zui早。在燒傷病人中,燒傷的面積、深度和嚴(yán)重程度與CRP水平有著一定的,測(cè)定CRP有助于估計(jì)預(yù)后以及選擇去痂和植皮的zui適時(shí)間。器官移植術(shù)后的病人出現(xiàn)移植排斥時(shí),CRP顯著升高,因止C進(jìn)行CRP的測(cè)定也具有重要意
 


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