核酸分為兩大類(lèi)：一類(lèi)為核糖核酸（RNA），另一類(lèi)為脫氧核糖核酸（DND）。核酸的分子量極大，人數(shù)萬(wàn)致億萬(wàn)。核酸是兩性化合物，在一定的等電點(diǎn)。溶于水，其水溶液呈酸性，不溶于乙醇等有機(jī)溶劑。細(xì)胞內(nèi)的核酸常和蛋白質(zhì)結(jié)合成核蛋白。核糖核蛋白和脫氧核糖核蛋白在不同濃度的電解質(zhì)溶液中的溶解度有顯著區(qū)別，有一定濃度范圍的氯化鈉溶液中，脫氧核糖核蛋白的溶解度隨著氯化鈉濃度增加而逐漸下降，當(dāng)氯化鈉濃度為0.14mol/L時(shí)，其溶解度僅為水中溶解度的1/100，但當(dāng)氯化鈉濃度再增加時(shí)，脫氧核糖核蛋白的溶解度重新增加，氯化鈉濃度增加到0.5mol/L時(shí)，其溶解度與水中溶解度相似，當(dāng)氯化鈉濃度增加到1mol/L時(shí)，它的溶解度比在水中大2倍。核糖核蛋白在0.14mol/L氯化鈉溶液中仍有相當(dāng)大的溶解度，因此常用0.14mol/L氯化鈉溶液提取核糖核蛋白，而提取脫氧核糖核蛋白時(shí)，則用1mol/L氯化鈉溶液。兩種核糖核蛋白的溶解度與溶液的pH也有關(guān)。當(dāng)pH為4.2時(shí)，脫氧糖核蛋白的溶解度zui低，而pH為2.0～2.5時(shí)，核糖核蛋白的溶解度zui低。所以調(diào)節(jié)氯化鈉溶液的濃度和pH值，可使核糖核蛋白和脫氧核糖核蛋白分離開(kāi)來(lái)。
?。?）RNA的提?。篟NA在細(xì)胞中主要有三種類(lèi)型，即rRNA（核微粒核糖核酸）、tRNA（轉(zhuǎn)移核糖核酸）和mRNA（信使核糖核酸）。mRNA代謝極不穩(wěn)定，提取時(shí)要求條件較嚴(yán)格；tRNA當(dāng)細(xì)胞破碎后，用酸處理得到“pH5”沉淀，即可從中分離tRNA；rRNA占全部RNA的80%以上，比較穩(wěn)定，一般提取的大分子RNA主要為此部分。核內(nèi)rRNA常先將細(xì)胞核分離后，再進(jìn)行提取，可避免其他細(xì)胞組分RNA的干擾。
RNA的提取，通常是用0.14mol/L氯化鈉溶液將組織做勻漿并反復(fù)提取細(xì)胞質(zhì)中的核糖核蛋白，而留下含有DNA的細(xì)胞核物質(zhì)，然后用10%醋酸調(diào)至pH4.2沉淀，離心棄去上清液，先用0.5mol/L氯化鈉溶液，后用水洗滌沉淀，將核糖核蛋白后溶解于0.5mol/L*溶液中，離心，取上清液，調(diào)pH至4.2,沉淀以0.5mol/L氯化鈉溶液洗滌，再一次除去脫氧核糖核蛋白。核糖核蛋白中的蛋白質(zhì)可用含有少量辛醇的氯仿抽提除去，核酸留在*水溶液中，加入乙醇，RNA即以鈉鹽形式沉淀出來(lái)。
提取RNA另一類(lèi)方法，不須事先用0.14mol/L氯化鈉提取核糖核蛋白，而一步將RNA的蛋白質(zhì)分開(kāi)，并同時(shí)把RNA抽提出來(lái)，此類(lèi)方法是在破碎細(xì)胞做成勻漿時(shí)，加入去污劑十二烷基磺酸鈉或二甲苯磺酸鈉；而現(xiàn)在zui常用的方法是直接加入含水*與勻漿一起振蕩，DNA和蛋白質(zhì)沉淀于酚層中，水層中含RNA和多糖，然后用乙醇使RNA沉淀，四種物質(zhì)一步便可初步分離開(kāi)。*法是目前提取不降解的RNAzui有效的方法，其應(yīng)用舉例如下：
肝臟rRNA的提取：按肝重（鮮）加入10倍容積*-甲酚混合液（500g*及70ml n-甲酚于50ml蒸餾水中，另加入0.5g 8-羥基喹啉配成）及10倍容積的0.5%萘-1，5-二磺酸水溶液（g/V）做勻漿后在20℃攪拌20min。
肝臟細(xì)胞核內(nèi)mRNA的提取：先分離細(xì)胞核，再將核懸浮于3倍容積的0.5%pH6.5的萘二磺酸水溶液（g/V）中勻漿后加入等量90%（g/V）*水溶液（內(nèi)含0.1%8-羥基喹啉）在2℃振蕩提取30min。
酵母tRNA的提?。?00g酵母（濕重）加入200ml水，300ml 90%*水溶液，振蕩2h,4℃冰箱中過(guò)液，使之提取*。
以上介紹了用冷酚法提取各種RNA的一些實(shí)例，近來(lái)還有皂土酚法（即除*外還加入皂土吸附蛋白質(zhì)）提取RNA，據(jù)報(bào)道比普通酚法提取RNA的生物活性高10倍左右。但應(yīng)用*法提取核酸時(shí)，須注意市售*常含有少量重金屬和雜質(zhì)，可能導(dǎo)致核酸降解，使用時(shí)，一般需要減壓重蒸。
?。?）DNA的提?。篋NA主要存在于細(xì)胞核中，天然狀態(tài)的DNA絕大多數(shù)是以脫氧核糖核蛋白形式存在。人細(xì)胞中提取DNA時(shí)，一般先獲得脫氧核糖核蛋白，再將蛋白質(zhì)除去，從中分離DNA。常用的方法是以1mol/L氯化鈉溶液抽提，得到的脫氧核糖核蛋白溶液與含有少量辛酸或戊醇的氯仿一起振蕩，除去蛋白質(zhì)。或者在組織細(xì)胞破碎后以低濃度0.14mol/L氯化鈉溶液（也可用0.1mol/L氯化鈉加0.05mol/L檸檬酸代替）反復(fù)洗滌除去核糖核蛋白，再以1mol/L氯化鈉提取脫氧核糖核蛋白，提取仍按氧仿-戊醇抽提法除去蛋白質(zhì)。兩種方法比較，后一種方法使核酸降解可能少一些。以稀鹽溶液提取DNA時(shí)，加入適量去污劑更有助于蛋白質(zhì)與DNA的分離。
應(yīng)用*法也可以提取DNA而且不用經(jīng)過(guò)脫氧核糖核蛋白這一步驟，例如大鼠肝勻漿在6%*鹽溶液內(nèi)，加入同體積90%*水溶液，室溫下提取1h，再經(jīng)進(jìn)一步提純可獲得98%～99%純度的DNA。*法也是目前提取DNAzui常用的方法之一。
?。?）活性多肽及遞質(zhì)的提取
大體上與蛋白質(zhì)的提取方法相似，可參照進(jìn)行。經(jīng)典神經(jīng)遞質(zhì)如*、腎上腺素、乙酰*、5-羥色胺等均可化學(xué)合成，無(wú)需用很多精力去提取。
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