1．合成開(kāi)始后檢查要點(diǎn)
合成開(kāi)始時(shí)，檢查第二個(gè)核苷酸脫DMT所產(chǎn)生的橘色，保證一切正常。*個(gè)DMT的顏色不能作為提供資料的依據(jù)，因?yàn)樗禽d體上裝進(jìn)的*個(gè)核苷的量度。檢查合成柱是否滲漏，滲漏原因可能是由于柱子錯(cuò)誤或柱子與合成儀上的luer接頭未擰緊所致。檢查監(jiān)視器上的詳細(xì)內(nèi)容，必要時(shí)重新存儲(chǔ)所需參數(shù)。
2．自動(dòng)DNA合成儀上試劑的穩(wěn)定性
無(wú)論合成進(jìn)行到什么程度，試劑管道中的單體每幾分鐘就需要補(bǔ)充一次，不會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的亞磷酰胺分解。但是如果儀器已經(jīng)1h以上未運(yùn)行，在合成開(kāi)始前必須清洗試劑管路，除去管內(nèi)分解的試劑。即使在的條件下，試劑的壽命也是有限的，因此，要將在合成儀上存放2周以上的試劑棄去；對(duì)于合成30個(gè)堿基12 1-_的寡核苷酸，應(yīng)用的亞磷酰胺和四唑在合成儀上的時(shí)間應(yīng)短于一周。對(duì)于合成50mer或更長(zhǎng)的寡核苷酸，應(yīng)該用新鮮的亞磷酰胺、四唑和乙腈。
3．自動(dòng)DNA合成儀上的試劑更換
在某一合成期間任何一種試劑用完都會(huì)導(dǎo)致合成失敗，所以在合成前必須檢查所有儲(chǔ)液瓶?jī)?nèi)的試劑量。如果實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度降至18~C以下，需要用電吹風(fēng)溫?zé)醿?chǔ)液瓶，使某些結(jié)晶溶解。如果一個(gè)位置配有一個(gè)一次性的瓶塞，當(dāng)新瓶子放到合成儀上時(shí)，要檢查并更換瓶塞。任何裂開(kāi)的瓶塞都不能使用，*性的瓶塞也要檢查。另外，要檢查試劑瓶口邊緣是否有缺口，缺口瓶在合成儀上塞不緊，不能輸送試劑。
4．合成中更換試劑瓶
在特定循環(huán)上單體縮合、封閉、氧化完成后，等待用乙腈清洗，并中斷循環(huán)和三個(gè)柱。然后按正常方法換瓶，取消所有中斷信息，重新開(kāi)始合成，千萬(wàn)不要讓合成中斷超過(guò)lmin，這樣會(huì)使偶聯(lián)率下降或造成合成失敗。
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