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技術(shù)文章

DNA合成儀的基本組成結(jié)構(gòu)和性能

閱讀:666發(fā)布時間:2011-9-26

(一)壓力系統(tǒng)
系統(tǒng)壓力由超純氬(99.998%)提供。氬氣密度高、氧污染少,因此高壓氬氣常常用來啟動真空輔助系統(tǒng)及供給合成儀調(diào)節(jié)器。進入合成儀的氬氣通過10txm的顆粒過濾器后送到3個壓力調(diào)節(jié)器,調(diào)節(jié)器將氬氣輸送到特定的壓力閥來增加試劑和溶劑瓶的壓力。調(diào)節(jié)器也將氬氣供給柱子和試劑閥體。
(二)試劑和溶劑儲液瓶
儀器上每個儲液瓶都有特定的位置,儲液瓶蓋座和儀器上所有號碼相對應(yīng),儀器上的位置或儲液瓶的編號都是1—8(5個堿基的儀器為1~5)、9、10、11、12、14、15、18和19(配有自動分析的儀器)。將1~8號瓶向上推,在聚四氟乙烯插塞周圍有一“O”形環(huán),每一瓶頸內(nèi)部形成一氣密塞。因為試劑輸送系統(tǒng)是要加壓的,所以要使瓶
子與儀器之間的密封塞保持氣密性。選擇合適的一次性塞及在瓶上加“O”形環(huán)可以加強氣密性。
(三)壓力管路及輸送管路
每個瓶子都有一個氬氣壓力管道及輸送管道進入瓶蓋插塞,對于亞磷酰胺,1—8號瓶其壓力管道也作為排氣管。氬氣管要保持在液體水平以上,而輸送管卻伸到瓶的底部。當(dāng)閥門正確設(shè)置打開時,儲液瓶上部空間由氬氣加壓,液體被推進輸送管,流到其目的地。
(四)亞磷酰胺瓶排氣
除了加壓外,亞磷酰胺瓶都是用壓力排氣管排氣的。把亞磷酰胺放人儀器前,要用氬氣排除空氣使其凈化。凈化是通過輸送管輸送氣體,當(dāng)氣體輸送到瓶內(nèi)時,空氣經(jīng)壓力排氣管排出。這是由瓶子更換步驟自動完成的。廢液瓶是輸送系統(tǒng)的低壓側(cè),必須將出口與大氣相通。要確保排氣管通到通風(fēng)柜。如果排氣管阻塞,將會產(chǎn)生反壓,試劑和溶劑的輸送會受到抑制。
(五)輸送閥塊
試劑輸送系統(tǒng)包括兩個試劑閥塊(8堿基儀器有3個)及2個或4個柱閥塊。閥塊控制氣體和化學(xué)試劑流人柱子及出口。除亞磷酰胺和四唑以外,試劑和溶劑都被同時輸送到所有活化柱。當(dāng)有多個活化柱時,對流速的細微變化,以自動調(diào)節(jié)每個柱子的輸送次數(shù)來補償。每一個5—端口柱閥塊將流出物導(dǎo)人廢液口、DMT收集口,或DNA收集瓶,它也控制用于除去或沖洗柱內(nèi)和柱閥塊內(nèi)的試劑的氬氣。
(六)輔助真空
對于閥塊的適當(dāng)運行,關(guān)鍵是隔膜形成一個圓頂小空隙,每次電磁閥打開時,抽氣泵為每個閥塊提供了輔助真空,輔助真空在隔膜的螺線管一側(cè)形成,使隔膜形成一圓頂空隙。
(七)柱子
起始結(jié)合在載體上的核苷酸是裝在一次性的柱子中,除柱體外,還有2個固定過濾板和2個接頭,所有的部件都由惰性材料制成。固定過濾板是多孑L性聚苯乙烯固定在兩端蓋子中。人口和出口都是母路厄氏(1uer)接頭,與儀器的公路厄氏接頭配對。柱子是對稱的(沒有頂端和底部、前后之分),可以以任何方式與公路厄氏接頭相連接。每一個柱子都用顏色編號,表示不同的起始核苷酸,以及有一個*的連續(xù)順序號碼。正常的流路是從底部進入,通過向上輸送液體,使CPG顆粒上升并保持懸浮狀態(tài)。溶劑和試劑的流速已經(jīng)設(shè)置好,能使顆粒適當(dāng)?shù)鼗旌稀?br />(八)路節(jié)流閥
試劑通過底部的luer接頭,流到柱子,如果沒擰上下面的一個luer接頭,應(yīng)會在一個圓柱形的玻璃流路節(jié)流閥上發(fā)現(xiàn)。試劑通過流路節(jié)流閥中一個很小的通道流到柱子。小量的試劑可以在流路節(jié)流閥中結(jié)晶,長期這樣會造成流路阻塞。
(九)廢液和排氣
大多數(shù)化學(xué)試劑輸送的zui終點是廢液瓶,廢液瓶是一個空立著的10L的聚苯乙烯容器,可放在合成儀附近的地板上或放在低于儀器的附近工作臺上。排氣管將廢氣導(dǎo)人適當(dāng)?shù)呐艢庋b置,如排煙罩(十)電導(dǎo)池
電導(dǎo)流動池是為了測定在每個DNA合成循環(huán)內(nèi)釋放的DMT陽離子的總電導(dǎo)而設(shè)計的。流動池是由一空隙隔開的兩個電極組成,在空隙之間應(yīng)用一小電壓。DMT陽離子流過電導(dǎo)池時起電導(dǎo)作用。
(十一)電池
DNA合成儀一般帶有鋰電池,可以使用幾年。當(dāng)主電源斷開時,所有的合成參數(shù)都被保留下來。這些參數(shù)包括儲存的DNA序列,用戶設(shè)定的循環(huán)、步驟和功能,以及瓶子使用資料等。如果正在合成中電源出現(xiàn)故障,合成將被中斷,只有主電源恢復(fù)時合成才可重新開始。電池還保持合成儀內(nèi)部的時鐘計時。
(十二)控制器
控制器指導(dǎo)和初始合成儀的所有活動,它的主要部分是軟件、微處理機、顯示屏幕、鍵板及相關(guān)的電子部件。軟件控制合成的所有必要操作并由微處理機來解釋和執(zhí)行。軟件儲存在一個可取出的存儲卡中,這個存儲卡插在儀器的背面。合成信息顯示在液晶顯示屏上,通過選擇鍵板上的鍵可與儀器交流。軟件是“菜單驅(qū)動”,通過按適當(dāng)?shù)逆I,可選擇一項,給予指令。為了完成自動合成,軟件應(yīng)用一個包含一系列步驟的循環(huán)來完成全部化學(xué)反應(yīng)。
 


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