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技術(shù)文章

酶標(biāo)抗體的質(zhì)量鑒定與保存

閱讀：503發(fā)布時(shí)間：2012-4-5

1． 酶活性和抗體效價(jià)測定

采用雙向免疫擴(kuò)散法（稀釋抗體）和DAB-H2O2 顯色反應(yīng)檢測結(jié)合物中抗體效價(jià)和免疫沉淀線中的酶促反應(yīng)。

2． 酶量和IgG量

酶量（mg/ml）=OD403 ′0.4

IgG量（mg/ml）=（OD280- OD402 ′0.42）′0.94′0.62

其中，0.42為酶蛋白本身（0.3）及結(jié)合戊二醛后增加的OD值，0.94為抗體蛋白與醛化酶結(jié)合后，OD280 約增加6%，故乘以0.94。兔IgG的OD280 =1.0時(shí)為0.62.

過碘酸鈉標(biāo)記法IgG量（mg/ml）=（OD280- OD402 ′0.3）′0.94′0.62

標(biāo)記率= OD403 / OD280 =0.3-0.6，即一個(gè)抗體分子上結(jié)合1-2個(gè)HRP分子.標(biāo)記率可以大于0.6-0.9。OD403 / OD280 =0.4，約相當(dāng)于E/P=1.0。

酶標(biāo)抗體的保存

經(jīng)鑒定合格的酶標(biāo)抗體，由于硫化物及疊氮化物等可與酶結(jié)合，使HRP失活，因此，不能用硫化物及疊氮化物作為防腐劑，可加入等量的60%甘油，小量分裝（0.5ml/支），置4℃~-30℃保存。
 

 


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