IL-11是由骨髓基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的一種細(xì)胞因子，具有促進(jìn)多系造血，增強(qiáng)T細(xì)胞、單核細(xì)胞依賴的B細(xì)胞抗體的生成，刺激肝細(xì)胞表達(dá)急性時(shí)相蛋白，誘導(dǎo)神經(jīng)組織分化等功能。目前已獲樣重組人IL-11（rhlL-11）。
本法是基于IL-11可促進(jìn)T10細(xì)胞的生長。因IL-6也有輕微的促T10細(xì)胞生長功能，在標(biāo)本中可能含IL-6時(shí)，應(yīng)用針對(duì)IL-6的中和抗體封閉后再測(cè)定。
1．向96孔培養(yǎng)板中每孔加RPMI-1640100／~L，A排1—3孔不加。
2．稀釋IL-11標(biāo)準(zhǔn)品成50U／mL，按如下稀釋加樣：A排1—3孔加入1501uL，轉(zhuǎn)移50／xL加入B排1—3孔，混勻；自B排1—3孔轉(zhuǎn)移50／xL至C排1～3孔，如此依次進(jìn)行至G排。H排1～3孔留作對(duì)照。
3．A排第4～6孑L、7—9孑L、10—12孑L各力口——種待測(cè)樣本，E排4—6孔、7—9孔、10—12孔加另三種樣本，同上法從A—D、E—H進(jìn)行系列稀釋。
以上為3倍系列稀釋，也可根據(jù)需要調(diào)整稀釋倍數(shù)，使IL-11zui低濃度為0．1～10U／L。
4。收獲T10細(xì)胞，室溫1 500r／rain離心5min，洗2次。
5．用5mL*RPMI-1640培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度至7．5X104／mi．。
6．向上述培養(yǎng)板中每孔加細(xì)胞懸液100／uL，培養(yǎng)3d，加3H-TdR，以下步驟同IL-2測(cè)定。
[附）T10細(xì)胞的維持培養(yǎng)：T10細(xì)胞是IL-6依賴性小鼠漿細(xì)胞瘤細(xì)胞系T1165在IL-“選擇下分化而來，其長期培養(yǎng)方法如下：①細(xì)胞自液氮中取出解凍后，用RPMI-164010mL懸浮，1 500r／min離心10rain，洗去DMSO；②用5mL培養(yǎng)液稀釋細(xì)胞，計(jì)數(shù)活細(xì)胞，用*RPMI-1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為105／mL，接種培養(yǎng)瓶；③加1 000U／mL的IL-110．2mL于培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)3、4山④收獲細(xì)胞，同上離心后，取5X105個(gè)活細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶，加培養(yǎng)液至10mL，同上加IL-11，培養(yǎng)傳代。并注意觀察培養(yǎng)細(xì)胞，若活細(xì)胞數(shù)<70％，降低細(xì)胞濃度至2X104／ml.
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