Boyden法比瓊脂糖法敏感，能檢測出納克（nz）水平的趨化因子活性，且需時間短、重復(fù)性好，現(xiàn)已被廣泛采用。
Boyden小室由上、下兩室組成，下室為一盲端，兩室間用一層硝酸纖維素膜分隔。當下室加入IL-8或待測因子，上室加入細胞時，因子在膜的兩側(cè)很快形成濃度梯度，細胞從上室低濃度處向著下室膜移動，根據(jù)遷移細胞的多少和細胞類型判斷趨化活性的強弱及性質(zhì)。
（1）外周血粒細胞或單核細胞的制備：取肝素抗凝血5—10mL，經(jīng)Ficoll—*密度梯度離心分離，得到單個核細胞、粒細胞和紅細胞沉淀，將粒細胞、紅細胞沉淀用低滲氯化銨處理溶解紅細胞，即得到粒細胞。
（2）用含5％NCS的DMEM培養(yǎng)液洗細胞2次，調(diào)整細胞濃度至2×106／mL備用。
（3）趨化試驗：在Boyden小室的下室分別加入陽性對照，陰性對照及待測因子樣品，每個濃度三個小室。
（4）蓋上硝酸纖維素膜，注意下室液體和硝酸纖維素膜之間不應(yīng)有氣泡，上室、下室液體之間不應(yīng)互相流通。
（5）蓋上上室，每一上室加入200／uL細胞懸液，注意加樣時應(yīng)輕放加樣器，以防損壞硝酸纖維素膜。
（6）置37℃，5％C02條件下孵育2h，孵育過程不應(yīng)移動小室，以防破壞梯度。
（7）去除上室細胞，將膜取出，甲醇短時固定，蘇木精染色，封片鏡檢。
（8）計算移動指數(shù)：高倍鏡下計數(shù)每張膜下細胞數(shù)，按下式求出移動指數(shù)
移動指數(shù)=實驗組細胞數(shù)／陰性對照組細胞數(shù)
（9）如所加細胞為?昆合細胞，可用另一種改進Boyden室，其上下室的容積分別為1．5mL，因此可將進入下室的細胞收集在試管中，分別進行熒光抗體染色，4~C，30min。然后加人第二抗體4~C，30min。詳細方法見IL-4檢測。
（10）流式細胞儀分析細胞表型，觀察檢測樣本所趨化的細胞類型。
根據(jù)所加細胞不同，選擇不同孔徑的硝酸纖維素膜，粒細胞為3um孔徑膜，淋巴細胞為8／um孔徑膜。
