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技術(shù)文章

表皮生長因子（EGF）的測定方法

閱讀：4277發(fā)布時間：2012-7-7

EGF主要來源于頒下腺。成年人許多組織中也表達EGF。人成纖維細胞、唾液腺癌細胞等也可產(chǎn)生EGF。EGF的作用沒有種屬特異性，人和小鼠的EGF對人成纖維細胞的作用相同。

1．Swiss 3T3細胞增殖法
（1）用含5％FCS的DMEM培養(yǎng)液將Swiss 3T3細胞調(diào)整成1×104／mL，接種于60mm的培養(yǎng)皿中（5mL），置37C 5％C02溫箱中培養(yǎng)4～5d，待細胞匯合后，更換上述培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)2～3d，此時細胞數(shù)不再增多。
（2）分別加入200ral系列稀釋的待測樣品或標(biāo)準(zhǔn)品，陰性對照加培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)4d。
（3）采用3H-TdR摻人法或比色法測定細胞增殖反應(yīng)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算待測樣品中EGF的含量（活性），或用誘導(dǎo)50％zui大細胞增殖的zui高稀釋度表達EGF的含量。

2．BALB／c 3T3細胞增殖法
（1）用含5％FCS的DMEM培養(yǎng)液將Swiss 3T3細胞調(diào)整成2×104／mL，接種于60mm的培養(yǎng)皿中（5mI），置37C 5％C02溫箱中培養(yǎng)5ho更換同樣培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。
（2）向培養(yǎng)物中加入100~L系列稀釋的待測樣品或標(biāo)準(zhǔn)品，陰性對照培養(yǎng)皿加培養(yǎng)液，培養(yǎng)16h后，同上法測定和計算EGF的含量（活性）。


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