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閱讀:921發(fā)布時間:2011-06-02
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考馬斯亮藍屬于三苯甲烷類染料,可與蛋白質(zhì)形成較強的非共價復合體??捡R斯亮藍R250多用于聚丙烯酰胺凝膠電泳后蛋白質(zhì)條帶的染色;考馬斯亮藍G250是布拉德福德(Bradford)蛋白質(zhì)定量試劑的主要成分。 廣泛用于對電泳蛋白質(zhì)染色的藍色染料。也可顯示出細胞骨架及蛋白質(zhì)在細胞中的顯微分布。
考馬斯亮藍G-250在游離狀態(tài)下呈紅色,zui大光吸收在465nm;當它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)榍嗌?span style="color: #ff00ff">蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物在595nm波長下有zui大光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比。 考馬斯亮藍R250與蛋白質(zhì)反應(yīng)雖然比較緩慢,但是可以被洗脫下去,所以可以用來對電泳條帶染色。
考馬斯亮藍一定范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)濃度成正比,因此可用于蛋白質(zhì)的定量測定。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍G-250結(jié)合在2min左右的時間內(nèi)達到平衡,完成反應(yīng)十分迅速;其結(jié)合物在室溫下1h內(nèi)保持穩(wěn)定。該法是1976年Bradford建立,試劑配制簡單,操作簡便快捷,反應(yīng)非常靈敏,靈敏度比Lowry法還高4倍,可測定微克級蛋白質(zhì)含量,測定蛋白質(zhì)濃度范圍為0~1 000μg/mL,是一種常用的微量蛋白質(zhì)快速測定方法。
考馬斯亮藍有G250和R250兩種。其中考馬斯亮藍G250由于與蛋白質(zhì)的結(jié)合反應(yīng)十分迅速,常用來作為蛋白質(zhì)含量的測定??捡R斯亮藍R250與蛋白質(zhì)反應(yīng)雖然比較緩慢,但是可以被洗脫下去,所以可以用來對電泳條帶染色。
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