一、用途
本試劑盒用于人血清中促卵泡刺激素（FSH）濃度的定量檢測。
二、概述及檢測原理
促卵泡激素（FSH）和黃體激素（LH）與性腺組織的生長和生殖活動密切相關(guān)。性腺組織中合成和分泌的雄性和雌性性激素通過負(fù)反饋控制著FSH和LH的循環(huán)水平。
FSH是垂體前葉的嗜堿細(xì)胞分泌的糖蛋白。促性腺素釋放激素（GnRH）由下丘腦產(chǎn)生，控制著垂體前葉中FSH的釋放。象其它糖蛋白如LH、TSH和HCG一樣，F(xiàn)SH是由α和β亞基組成的。這類激素的α亞基的結(jié)構(gòu)是很相似的，因此，這些激素的生物學(xué)和免疫學(xué)特性的區(qū)別取決于其*的β亞基。
在女性體內(nèi)，F(xiàn)SH通過作用于顆粒細(xì)胞上的受體，刺激著卵巢卵泡的發(fā)育和成熟，同時促進(jìn)了卵泡類固醇和LH的生成。生成的LH結(jié)合到膜細(xì)胞上，進(jìn)一步刺激類固醇的生成。卵巢內(nèi)的雌二醇量隨著卵泡的成熟而增加，因此，這促進(jìn)FSH受體的活性和FSH卵泡的結(jié)合能力。所以，F(xiàn)SH、LH和雌二醇在維持女性卵巢復(fù)原和成熟方面密切相關(guān)。
在絕經(jīng)或卵巢切除后，以及早熟卵巢的衰退期，F(xiàn)SH的水平升高。FSH的水平由雌激素通過負(fù)反饋進(jìn)行調(diào)控。FSH和LH，或者FSH和雌激素之間的關(guān)系一旦失衡，有可能引起神經(jīng)性厭食和多囊卵巢的疾病。當(dāng)隨機的FSH濃度超過40mIU/ml時，則表明卵巢衰退，盡管也有些明顯的例外。
在男性體內(nèi)，生精小管的發(fā)育和生精作用的保持都是由FSH調(diào)控的。不過，雄激素并不象雌激素一樣會降低FSH水平。因此，證明負(fù)反饋關(guān)系只能通過血清LH。
不太清楚是什么原因，缺精子或少精子的男性體內(nèi)的FSH的水平經(jīng)常提升。經(jīng)放射性免疫測定，受試者的腫瘤通常會降低血清FSH濃度，但卻提高了LH的水平。會引起與受試者腫瘤分泌的類似人絨毛膜*（hCG）物質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)。
男性體內(nèi)高水平的FSH會在睪丸衰退和克蘭費爾特氏綜合癥的初期出現(xiàn)。FSH的濃度在饑餓、腎衰竭、甲狀腺機能亢進(jìn)和肝硬化時也會有所提高。
BioCheck FSH EIA檢測的原理是基于固相酶聯(lián)免疫吸附檢測。該檢測系統(tǒng)是利用了作為固相（微孔板）固定劑的鼠單克隆抗α-FSH抗體，以及抗體酶（辣根過氧化物酶）結(jié)合物溶液中的鼠單克隆抗β-FSH抗體。被測樣品同時與兩個抗體發(fā)生反應(yīng)致使FSH分子夾在固相和酶聯(lián)抗體之間。室溫下溫育45分鐘后，用去離子水或蒸餾水洗掉未結(jié)合的標(biāo)記抗體。然后加入四甲基聯(lián)苯胺（TMB），在室溫下溫育20分鐘，溶液逐漸變藍(lán)。加入HCL后，終止顏色變化，溶液zui終呈黃色。再用分光光度計在450nm波長下測定黃色溶液的吸光值，F(xiàn)SH濃度與檢測樣品色度成正比關(guān)系。
二、試劑盒的組成
1．包被有抗體的微孔板：96孔，1塊。
2．參照標(biāo)準(zhǔn)品：1套（0，5，15，50，100和200mIU/mL）。
3．酶聯(lián)試劑：13mL。
4．TMB試劑（一步）：11mL。
5．終止液（1N HCL）：11mL。
三、自備材料
1．精密吸管50µL，100µL，200µL和1.0mL。
2．一次性吸頭。
3．蒸餾水。
4．渦旋混合器或等同物。
5．吸水紙或紙巾。
6．坐標(biāo)紙。
7．酶標(biāo)儀。
四、樣品的采集和準(zhǔn)備
血清由全血樣品制備，用于本試劑盒的血清樣品須無任何添加物。
五、試劑盒的保存和所用儀器
未啟封的試劑盒須保存在2~8℃下；微孔板放在有干燥劑的密封袋里，以盡量減少其在潮濕空氣中的暴露；已啟封的試劑盒在上述保存條件下，在有效期內(nèi)可保持穩(wěn)定。用酶標(biāo)儀在450nm處測定吸收值時，要求譜寬≤l0nm，光密度值（O.D.）在0~2之間或更大些。
六、試劑的準(zhǔn)備
1．在檢測前要使所有試劑達(dá)到室溫（18~25℃，下同）。
2．用1.0mL蒸餾水溶解每個凍干的標(biāo)準(zhǔn)品（zui少需20分鐘）。已溶解的標(biāo)準(zhǔn)品須在2~8℃下密封保存。
七、檢測步驟
1．將所需數(shù)量的微孔固定在微孔架上，標(biāo)注加樣順序，制作數(shù)據(jù)表。
2．分別吸取50µL標(biāo)準(zhǔn)品、樣品加入到相應(yīng)的微孔中。建議：雙份設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品、樣品。
3．取100µL酶聯(lián)試劑分別加入到每個微孔中。
4．充分混合30秒鐘（此步至關(guān)重要）。
5．室溫（18~25℃）溫育約45分鐘。
6．翻轉(zhuǎn)微孔板，棄掉溫育混合物。
7．用蒸餾水沖洗微孔5次（請勿使用自來水）。
8．在吸水紙或紙巾上扣擊微孔以*除去微孔中殘存的水滴。
9．向每個微孔中分別加入100µL的TMB試劑，輕輕混合10秒鐘。
10．室溫暗處溫育20分鐘。
11．向每個微孔加入100µL終止液（1N HCL）終止反應(yīng)。
12．輕輕地混合30秒鐘（確保藍(lán)色全部變成黃色，此步至關(guān)重要）。
13．用酶標(biāo)儀在450m處于15分鐘內(nèi)讀出光密度值。
注意：沖洗是關(guān)鍵步驟，不適當(dāng)?shù)臎_洗會導(dǎo)致度不準(zhǔn)和吸收值讀數(shù)錯誤地升高。
八、結(jié)果計算
在酶標(biāo)儀上讀出參照標(biāo)準(zhǔn)品、樣品的平均吸收值（A450）。以每個參照標(biāo)準(zhǔn)品的平均吸收值作縱軸（Y），其相應(yīng)濃度值（mIU/mL）作橫軸（X），在坐標(biāo)紙上繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)每個樣品的平均吸收植在標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出相應(yīng)的FSH濃度值（mIU/mL）。
九、典型曲線實例
在450nm處測得的光密度值在Y軸上，其相應(yīng)的FSH濃度值在X軸上，從而得出典型的標(biāo)準(zhǔn)曲線。此標(biāo)準(zhǔn)曲線僅用于示例，不能用于計算未知樣品。每個使用者應(yīng)根據(jù)自己的數(shù)據(jù)制作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
| FSH（mIU/mL） | Absorbance（450nm） |
| 0 | 0.058 |
| 5 | 0.133 |
| 15 | 0.265 |
| 50 | 0.782 |
| 100 | 1.483 |
| 200 | 2.885 |
十、期望值和靈敏度
男性（100名）平均正常值：1lmIU/mL；
女性（150名）平均正常值：12mIU/mL；
絕經(jīng)后女性（60名）平均正常值：94mIUI/mL；
懷孕期女性（60名）平均正常值：1.0mIU/mL；
測得FSHzui低濃度為2.5mIU/mL。
十一、單位換算：1ng/ml=4.2mIU/ml的FSH
