目前，胸膜肺炎放線桿菌比較難以分離，其原因有待進一步研究。本研究分離出6株APP地方分離株，人ELISA試劑盒對我國豬傳染性胸膜肺炎的病原學(xué)與流行病學(xué)研究積累了一定的菌株資源。同時，對ApxⅡ-ELISA和ApxⅣ-ELISA兩種抗體檢測試劑盒進行了產(chǎn)業(yè)化研究，其中ApxⅣ-ELISA達到臨床應(yīng)用水平，對豬傳染性胸膜肺炎的診斷與防控具有十分重要的意義。
胸膜肺炎放線桿菌是引起豬傳染性胸膜肺炎的病原，給養(yǎng)豬業(yè)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。目前共有15個血清型，該病原菌的主要毒力因子包括CPS、LPS、OMP、TBP、粘附因子、內(nèi)毒素、尿素酶等。Apx毒素是APPzui主要的毒力因子，現(xiàn)證明不同血清型的菌株可產(chǎn)生4種Apx，ApxⅡ除血清型10和14以外，其它血清型都分泌；任何血清型都能在體內(nèi)分泌毒素蛋白ApxⅣ，但體外培養(yǎng)的細菌卻不能分泌該毒素。
本研究包括如下三方面的內(nèi)容：
1．胸膜肺炎放線桿菌的分離鑒定 將病料接種培養(yǎng)基，經(jīng)過24小時的培養(yǎng)后將細菌進行純化，挑單菌落革蘭氏染色、鏡檢，將細菌接種到細菌鑒定微量反應(yīng)管，同時以細菌制備模板，做apxⅣ-PCR，然后經(jīng)過瓊脂擴散試驗確定血清型。結(jié)果從患病豬的肺、關(guān)節(jié)分離到胸膜肺炎放線桿菌6株，其中，4株4型，1株3型，1株未定型。
2．胸膜肺炎放線桿菌ApxⅡ-ELISA抗體檢測試劑盒的研制及其應(yīng)用 根據(jù)ApxⅡ的特點，實驗室已經(jīng)建立了一種能夠監(jiān)測疫苗免疫后的抗體水平和對疫苗免疫效果進行評估的血清學(xué)方法ApxⅡ-ELISA；本研究將該診斷方法進一步研制成試劑盒，對其特異性、敏感性、重復(fù)性和穩(wěn)定性進行了測試，與間接血凝試驗試劑盒進行了對比研究，并用該試劑盒檢測了來自中國、美國、加拿大、丹麥、澳大利亞和英國的臨床豬血清1453份，同時也制作了ApxⅡ的抗體削長規(guī)律曲線 結(jié)果表明ApxⅡ-ELISA試劑盒具有很高的特異性和敏感性；三批試劑盒的批內(nèi)和批間的重復(fù)性良好（變異系數(shù)均＜15％）；人ELISA試劑盒試劑盒在2～8℃保存9個月內(nèi)穩(wěn)定性良好；檢測來自中國、美國、加拿大、丹麥、澳大利亞和英國的臨床豬血清的陽性率分別為49.56％、85.51％、1.92％、73.33％、1.85％和100％。從ApxⅡ抗體消長規(guī)律的曲線可以看出，疫苗免疫后3周或者4周就可以監(jiān)測到ApxⅡ抗體，抗體水平達到峰值時，其值為1∶1280。ApxⅡ-ELISA試劑盒能夠有效的診斷豬傳染性胸膜肺炎，同時也可作為一種評價豬群免疫后免疫效果的有效方法；
3．胸膜肺炎放線桿菌ApxⅣ-ELISA抗體檢測試劑盒的研制及其應(yīng)用 根據(jù)ApxⅣ的特點，實驗室已經(jīng)建立了一種能夠特異性的診斷豬傳染性胸膜肺炎，并且能夠有效的區(qū)分感染豬與免疫豬的鑒別診斷方法ApxⅣ-ELISA。本研究將該診斷方法進一步研制成試劑盒，對其特異性、敏感性、重復(fù)性和穩(wěn)定性進行了測試，與間接血凝試驗及IDEXX公司的CHEKIT-APP-APXⅣ試劑盒進行了對比研究，并用該試劑盒檢測了來自中國、美國、加拿大、丹麥、澳大利亞和英國的臨床豬血清1453份，同時也制作了ApxⅣ的抗體削長規(guī)律曲線。人ELISA試劑盒 結(jié)果表明ApxⅣ-ELISA試劑盒具有很高的特異性和敏感性，與CHEKIT-APP-APXⅣ試劑盒的檢測符合率為91.37％；三批試劑盒的批內(nèi)和批間的重復(fù)性良好（變異系數(shù)均＜15％）；試劑盒在2～8℃保存9個月內(nèi)穩(wěn)定性良好；App感染后3周或者4周就可以監(jiān)測到ApxⅣ抗體，抗體水平達到峰值時，其值為1∶640。檢測來自中國、美國、加拿大、丹麥、澳大利亞和英國的臨床豬血清的陽性率分別為22.30％、39.72％、0.64％、42.22％、1.85％和93.94％。ApxⅣ-ELISA試劑盒能夠有效區(qū)分APP感染豬與三價滅活疫苗或亞單位疫苗免疫豬。
