1、大鼠elisa檢測(cè)試劑盒檢驗(yàn)?zāi)康?br />    應(yīng)用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法原理（ELISA）定性檢測(cè)人血清、血漿標(biāo)本中的HIV（1+2）型抗體的測(cè)定，用于HIV感染的輔助診斷，抗HIV藥物治療的效果的
2、原理
采用夾心ELISA方法檢測(cè)血清或血漿標(biāo)本中人類(lèi)免疫缺陷病毒HIV（1+2）型抗體，預(yù)包被高純度基因重組HIV（1+2）型抗原，可與標(biāo)本中的抗-HIV抗體反應(yīng)，加入HRP標(biāo)記HIV（1+2）型抗體抗原結(jié)合，形成抗原－抗體－酶標(biāo)抗原復(fù)合物，然后加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度（OD值），根據(jù)OD值判斷HIV抗體的存在與否。
3、性能參數(shù)
靈敏度高（0.5ng/ml）
4、標(biāo)本要求
  （1）標(biāo)本類(lèi)型：血清，血漿。
（2）標(biāo)本采集：見(jiàn)標(biāo)本采集手冊(cè)
（3）標(biāo)本儲(chǔ)存和運(yùn)輸：室溫放置不超過(guò)8小時(shí)，2-8℃不超過(guò)72小時(shí)，-20℃可*保存，應(yīng)避免反復(fù)凍融
（4）標(biāo)本拒收狀態(tài)：細(xì)菌污染，嚴(yán)重溶血或脂血標(biāo)本不能作測(cè)定。
5、容器和添加劑類(lèi)型
6、試劑
（1）試劑名稱：人類(lèi)免疫缺陷病毒HIV（1+2）型抗體診斷試劑盒。
（2）試劑生產(chǎn)廠家：北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)有限公司
（3）包裝規(guī)格：96T/Kit
（4）試劑盒組成：①、HIV酶標(biāo)板；②、HIV酶標(biāo)試劑；③、HIV（1+2）型陽(yáng)性及陰性對(duì)照血清；④、顯色劑A液和B液；⑤、此外還有濃縮洗滌液、終止液、自封袋、封板膜、說(shuō)明書(shū)等。人ELISA試劑盒
7、儀器設(shè)備：
酶標(biāo)儀：ZS板式，北京普朗生物技術(shù)有限公司，每年由計(jì)量單位進(jìn)行一次校準(zhǔn)。
洗板機(jī)：DNM-9620型，北京普朗生物技術(shù)有限公司，每年由國(guó)家計(jì)量單位進(jìn)行一次校準(zhǔn)。
移液器：上海求精，每年由國(guó)家計(jì)量單位進(jìn)行一次校準(zhǔn)。
8、校準(zhǔn)程序 
送xx市計(jì)量檢測(cè)所校準(zhǔn)
9、操作步驟
①、配液：將50ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋至1000ml備用。
②、編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板設(shè)陰性對(duì)照3孔、陽(yáng)性對(duì)照Ⅰ型、Ⅱ型各1孔，空白對(duì)照1孔。人ELISA試劑盒
③、加樣：分別在相應(yīng)孔加入待檢標(biāo)本、陰性、陽(yáng)性對(duì)照100μl，用封板膜封板后置37℃溫育30min。人ELISA試劑盒
④、洗滌：小心把封板膜揭去，用洗板機(jī)選擇5次程序，洗板后拍干。
⑤、加酶：每孔加酶結(jié)合物100μl（空白對(duì)照孔除外），充分混勻，用封板膜封板后置37℃溫育30min。
   ⑥、洗滌：小心把封板膜揭去，用洗板機(jī)選擇5次程序，洗板后拍干。。
   ⑦、顯色：每孔加入顯色劑A液和B液各50μl，輕輕振蕩混勻，封板后置37℃避光顯色15min。
   ⑧、測(cè)定：每孔加終止液50μl，輕輕振蕩混勻。設(shè)定酶標(biāo)儀波長(zhǎng)為450nm（建議使用雙波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀比色，參考波長(zhǎng)630 nm），空白調(diào)零，讀取各孔OD值。
⑨、判斷結(jié)果：計(jì)算臨界值（cut-off）（CO）值。
臨界值＝陰性對(duì)照A均值＋0.12
正常情況下，陰性對(duì)照孔的OD值≤0.10（若1孔陰性對(duì)照的OD值＞0.1應(yīng)舍棄，若有2孔或2孔以上陰性對(duì)照的OD值＞0.1，應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。）。樣品OD值＜臨界值者為HIV抗體陰性。
   大鼠elisa檢測(cè)試劑盒正常情況下，陽(yáng)性對(duì)照孔的OD值≥0.80（若1孔陽(yáng)性對(duì)照的OD值＜0.8應(yīng)舍棄，若有2孔或2孔以上陽(yáng)性對(duì)照的OD值＜0.8，應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。樣品OD值≥臨界值者為HIV抗體陽(yáng)性。
注意：對(duì)于篩查陽(yáng)性標(biāo)本，應(yīng)重新取樣雙孔復(fù)試，復(fù)試陽(yáng)性者應(yīng)按照《全國(guó)*管理規(guī)范》送HIV確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確證試驗(yàn)。
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