Tis-EDTA抗原修復(fù)液(50×)免疫檢測(cè)

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商品介紹：

免疫染色實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞或組織往往需要經(jīng)多醛、甲醛或其他醛類固定來維持本身的形態(tài)結(jié)構(gòu)，然而此步操作通常會(huì)封閉抗原決定簇，使得相當(dāng)多的抗原不能與抗體很好的進(jìn)行反應(yīng)，從而引起染色信號(hào)衰減，甚至出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象。引起抗原決定簇被掩蓋的原因在于：1）醛類固定劑導(dǎo)致組織上的許多氨基酸殘基在分子內(nèi)或分子間形成醛鍵，從而封閉抗原表位；2）醛類固定劑在固定過程中與蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)（cross-link），形成醛交聯(lián)蛋白，導(dǎo)致抗原表位被封閉。因此，需要對(duì)固定組織進(jìn)行抗原修復(fù)（antigen retrieval，AR）來逆轉(zhuǎn)被掩蓋的抗原表位，使其重新暴露出來，恢復(fù)抗原表位-抗體的結(jié)合能力，從而改善染色效果。

抗原修復(fù)的方法非常多，主要有熱誘導(dǎo)的抗原修復(fù)（Heat Induced Epitope Retrieval，HIER）和酶誘導(dǎo)的抗原修復(fù)（Proteolytic Induced Epitope Retrieval），修復(fù)方法的選擇需要考慮到抗原表達(dá)程度、抗體要求、組織類型以及組織固定方法等因素。作為免疫染色至關(guān)重要的一步，抗原修復(fù)方法的選擇、溫度、pH值、修復(fù)時(shí)間、修復(fù)介質(zhì)都會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自身的實(shí)驗(yàn)體系以及實(shí)驗(yàn)條件來選擇恰當(dāng)?shù)男迯?fù)溶液，從而達(dá)到佳的修復(fù)效果。

本品為Tris-EDTA抗原修復(fù)液，pH 9.0，適合用于經(jīng)甲醛固定的石蠟切片的抗原修復(fù)。本品為50×的濃縮液，使用前需用ddH2O稀釋成1×工作液。

儲(chǔ)存條件：常溫。

步驟和注意事項(xiàng)：?

準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)環(huán)境：?確保實(shí)驗(yàn)區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計(jì)數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細(xì)胞培養(yǎng)：?

準(zhǔn)備試管或培養(yǎng)皿、?細(xì)胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細(xì)胞。?

取出保存于低溫下的細(xì)胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細(xì)胞凍存與復(fù)蘇：?

細(xì)胞系的凍存是將生長較好的傳代細(xì)胞懸浮在加有冷凍保護(hù)劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對(duì)其長期保存的過程。?

復(fù)蘇則是將凍存的細(xì)胞系恢復(fù)到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細(xì)胞活力。?

細(xì)胞計(jì)數(shù)：?

制備細(xì)胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細(xì)胞或收集懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，?制成單個(gè)細(xì)胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格中的細(xì)胞數(shù)，?細(xì)胞壓中線時(shí)，?只計(jì)左側(cè)和上方者，?不計(jì)右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，?并觀察細(xì)胞所發(fā)出的熒光信號(hào)，?以研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應(yīng)（?PCR）?：?

準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應(yīng)液配制表制備反應(yīng)液。?

在反應(yīng)器中加入反應(yīng)液，?開始PCR反應(yīng)。?

PCR反應(yīng)的成功與否，?可以通過電泳、?測(cè)序等方法進(jìn)一步確認(rèn)。?

轉(zhuǎn)染：?

準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細(xì)胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細(xì)胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞，?并進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。?

在操作過程中，?應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時(shí)登記購買耗材或試劑，?保持實(shí)驗(yàn)環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：