Western一抗二抗清除劑(酸性)免疫檢測

商品介紹：

本品用于Western中轉(zhuǎn)移了蛋白的膜的重復(fù)利用。在Western中完成了一抗二抗結(jié)合和后續(xù)的化學(xué)發(fā)光檢測后，有時還需要檢測tubulin、actin等表達量相對穩(wěn)定的蛋白作為參照，或檢測其它蛋白進行比較。通過使用一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用過的膜檢測其它蛋白。和重新跑一個SDS-PAGE膠相比，不僅省時省力，而且可以消除重新上樣而帶來的誤差，使可比性更強。

商品屬性：

使用Western一抗二抗去除液多次重復(fù)使用同一張膜，會導(dǎo)致蛋白信號的減弱。但是，本W(wǎng)estern一抗二抗去除液，經(jīng)過多個抗體的檢測試驗，通?？梢灾貜?fù)利用膜3-5次。使用本試劑只需大約40-80分鐘即可實現(xiàn)蛋白膜的重復(fù)使用，然后可以進行封閉等后續(xù)的Western操作。

不同的Western一抗二抗去除液主要在去除結(jié)合的一抗二抗的原理方面略有不同。分別依靠去垢劑、酸性、堿性、還原劑、螯合劑、鹽濃度以及一些特殊試劑等的不同組合來解除一抗二抗的結(jié)合，同時又不會導(dǎo)致轉(zhuǎn)移到膜上的蛋白的損失。

用于普通的Western檢測時蛋白膜上一抗二抗的去除可以任選一種去除液。如果是NC膜，即硝酸纖維素膜時，不宜選用YT071N。從時間角度考慮，強堿性、弱堿性和中性的去除液所需的時間都比較短，可以優(yōu)先考慮。從價格因素考慮，強堿性的去除液性價比高。從安全性考慮，中性的去除液由于沒有腐蝕性而表現(xiàn)出更高的安全性。弱堿性和弱酸性一抗二抗去除液的安全性次之。但只要正確操作，并進行適當防護，使用強堿性的一抗二抗去除液也是可行的。

　　對于特定的抗原和抗體，很難說哪一種Western一抗二抗去除液的效果好。在遇到一抗二抗去除效果欠佳時，可以考慮適當延長一抗二抗去除液的孵育時間，同時確保孵育時的溫度不低于20℃。溫度過低時一抗二抗的去除效果會下降。同時也可以考慮嘗試其它的一抗二抗去除液，以摸索出佳的適合您實驗條件的Western一抗二抗去除液。

注意事項：

1. 使用辣根過氧化物酶(HRP)，任何一次封閉(blocking)都應(yīng)當使用5%脫脂牛奶，如果使用堿性磷酸酯酶，任何一次封閉都應(yīng)當使用酪蛋白(casein)。

2. 為取得佳效果，推薦使用PVDF膜。但硝酸纖維素膜也可以使用本W(wǎng)estern一抗二抗去除液。

3. 使用化學(xué)發(fā)光試劑進行的Western檢測適用本試劑。使用非化學(xué)發(fā)光試劑進行的Western檢測，例如DAB，NBT/BCIP，不適用于本試劑。

4. 本W(wǎng)estern一抗二抗去除液有輕微腐蝕性，使用時請注意防護。

儲存條件：室溫，有效期一年。

步驟和注意事項：?

準備實驗環(huán)境：?確保實驗區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養(yǎng)：?

準備試管或培養(yǎng)皿、?細胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養(yǎng)基和細胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細胞凍存與復(fù)蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復(fù)蘇則是將凍存的細胞系恢復(fù)到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數(shù)：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細胞或收集懸浮培養(yǎng)細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格中的細胞數(shù)，?細胞壓中線時，?只計左側(cè)和上方者，?不計右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發(fā)出的熒光信號，?以研究細胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應(yīng)（?PCR）?：?

準備PCR反應(yīng)所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應(yīng)液配制表制備反應(yīng)液。?

在反應(yīng)器中加入反應(yīng)液，?開始PCR反應(yīng)。?

PCR反應(yīng)的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉(zhuǎn)染：?

準備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應(yīng)注意實驗室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：