Caspase 9熒光法檢測試劑盒(AFC)細胞凋亡

商品屬性：

商品介紹：

本試劑盒適用于培養(yǎng)細胞及新鮮組織Caspase-9 檢測。Caspase 家族在介導細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用，其中Caspase-9 為關鍵的執(zhí)行分子，與DNA 斷裂、染色質凝聚和凋亡小體形成有關。Caspase-9 在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中，沒有活性；但在細胞發(fā)生凋亡階段，它被激活，活化的Caspase-9 由兩個大亞基和兩個小亞基組成，裂解相應的胞漿胞核底物，最終導致細胞凋亡。Caspase-9 熒光檢測試劑盒就是將Caspase-9 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團。當底物被Caspase-9 剪切后，發(fā)色基團即游離出來，可通過熒光酶標儀測定其熒光強度（激發(fā)波長=485nm,發(fā)射波長=535nm）。

注意事項

1. Caspase-9 Substrate 避光保存及使用。

2. 對某些凋亡誘導劑引起的細胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-9 活化的機制，這種情況時利用本試劑盒檢測Caspase-9 活性無明顯改變，需要考慮凋亡機制中的其他信號通路。

3. 細胞數量需達到3～5×106 個或新鮮組織50~100mg，以便能達到測定需要的100～200μg 蛋白的要求，因為Caspase-9 的活性與細胞裂解液的蛋白含量有關，如測定的RFU 值偏低，可以通過適當延長反應的時間，如果值還是不高，可通過增加細胞數量或組織量的方法來提高蛋白量。

步驟和注意事項：?

準備實驗環(huán)境：?確保實驗區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計數板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養(yǎng)：?

準備試管或培養(yǎng)皿、?細胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養(yǎng)基和細胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細胞凍存與復蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復蘇則是將凍存的細胞系恢復到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細胞或收集懸浮培養(yǎng)細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數板四角大方格中的細胞數，?細胞壓中線時，?只計左側和上方者，?不計右側和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發(fā)出的熒光信號，?以研究細胞結構和功能。?

聚合酶鏈反應（?PCR）?：?

準備PCR反應所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應液配制表制備反應液。?

在反應器中加入反應液，?開始PCR反應。?

PCR反應的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉染：?

準備轉染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉染試劑，?將DNA載體溶解于轉染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應注意實驗室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環(huán)境的清潔和安全

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