Caspase3/7活細胞熒光實時法試劑盒細胞凋亡

商品介紹：

凋亡早期的重要特征之一是半胱an酸特異性蛋白酶——caspase家族蛋白的活性激活。這一類酶可以參與到一系列的生化反應(yīng)中，響應(yīng)凋亡早期信號并導(dǎo)致相應(yīng)的蛋白底物剪切，繼而引發(fā)細胞解體。目的底物可識別的序列包含天門冬an酸殘基，剪切發(fā)生在序列的羰基段。

商品屬性：

Caspase3/7活細胞熒光實時法檢測試劑盒采用新型的熒光底物為原料，可以檢測凋亡細胞中激活的caspase3/7.這種具有膜親和型的檢測試劑盒由一個4氨基的小肽（DEVD）和一種核酸結(jié)合染料。凋亡發(fā)生時，caspase3/7蛋白被激活，從而剪切caspase3/7識別序列DEVD肽段。剪切底物后，游離的核酸染料與DNA結(jié)合，從而發(fā)出亮綠色熒光信號。

操作步驟

1.1 以合適的培養(yǎng)基懸浮細胞或貼壁細胞，加入合適的化合物或藥物，刺激細胞誘導(dǎo)凋亡。

1.2 去除藥物或化合物，以新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞2-3次，更換新鮮培養(yǎng)基后，以1μL/mL的量加入caspase3/7檢測液，使得caspase3/7檢測試劑工作液濃度為1μM。（注意： Caspase3/7 檢測試劑工作液濃度為0.5μM~2μM，您根據(jù)細胞量以及培養(yǎng)液的體積進行調(diào)整優(yōu)化。）

1.3 37℃，避光孵育30min，或室溫孵育45-60min。

1.4 熒光顯微鏡觀察拍照或熒光光度計讀數(shù)。

步驟和注意事項：?

準(zhǔn)備實驗環(huán)境：?確保實驗區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養(yǎng)：?

準(zhǔn)備試管或培養(yǎng)皿、?細胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養(yǎng)基和細胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細胞凍存與復(fù)蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復(fù)蘇則是將凍存的細胞系恢復(fù)到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數(shù)：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細胞或收集懸浮培養(yǎng)細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格中的細胞數(shù)，?細胞壓中線時，?只計左側(cè)和上方者，?不計右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發(fā)出的熒光信號，?以研究細胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應(yīng)（?PCR）?：?

準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應(yīng)液配制表制備反應(yīng)液。?

在反應(yīng)器中加入反應(yīng)液，?開始PCR反應(yīng)。?

PCR反應(yīng)的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉(zhuǎn)染：?

準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應(yīng)注意實驗室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：