小鼠棕色前脂肪細(xì)胞

2.組織來源：脂肪組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

小鼠棕色前脂肪細(xì)胞分離自棕色脂肪組織；動(dòng)物體內(nèi)存在棕色和白色兩種脂肪，白色脂肪堆積在皮下，負(fù)責(zé)儲(chǔ)存多余熱量；棕色脂肪負(fù)責(zé)分解引發(fā)肥胖的白色脂肪，將后者轉(zhuǎn)化成二氧化碳、水和熱量，本身不儲(chǔ)存熱量。棕色脂肪組織呈棕色，其特點(diǎn)是組織中有豐富的毛細(xì)血管，脂肪細(xì)胞內(nèi)散著許多小脂滴，線粒體大而豐富，核圓形，位于細(xì)胞中央，這種脂肪細(xì)胞也稱為多泡脂肪細(xì)胞。棕色脂肪組織在成年動(dòng)物極少，新生兒及冬眠動(dòng)物較多，在新生兒主要分布在肩胛間區(qū)、腋窩及頸后部等處。棕色脂肪組織僅在嬰兒時(shí)期發(fā)揮作用，它們堆積在新生兒肩胛處，幫助維持體溫。隨著年齡增長，棕色脂肪會(huì)逐漸消失。終，動(dòng)物體內(nèi)只殘存少量棕色脂肪細(xì)胞，分布于頸部和鎖骨。脂肪組織在體內(nèi)含有兩種主要的細(xì)胞：一種是在胞漿內(nèi)積聚脂滴的成熟脂肪細(xì)胞；另一種是雖未在胞漿內(nèi)積聚脂滴但有這種潛能的前脂肪細(xì)胞。前脂肪細(xì)胞呈梭形，有分裂和增殖的能力；成熟的脂肪細(xì)胞呈圓形，已經(jīng)失去了分裂及增殖的能力。由于前脂肪細(xì)胞是一類具有增殖和向脂肪細(xì)胞分化能力的特異化前體細(xì)胞，與肥胖有著非常密切的關(guān)系。前脂肪細(xì)胞是一種類成纖維細(xì)胞，在演變的過程中不斷吸收脂質(zhì)，終成為成熟的脂肪細(xì)胞。前脂肪細(xì)胞對外界機(jī)械損傷的抵抗力較強(qiáng)，可望成為軟組織缺損的有益填充物。

5.方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠棕色前脂肪細(xì)胞采用膠原酶消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠棕色前脂肪細(xì)胞經(jīng)油紅O染色檢測，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞處理：

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞，傳代可以參考以下方法：

1、收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤洗后細(xì)胞會(huì)脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2、加入0.25％（w / v）0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3、將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：

1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.

2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)：

1、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2、收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

3、由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

操作步驟：

步驟1：從冰箱拿出無血清非程序凍存液，待用

步驟2：離心收集對數(shù)生長期的細(xì)胞（貼壁細(xì)胞消化下來離心，懸浮細(xì)胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時(shí)間3min）

步驟3：棄上清，加入適量無血清非程序凍存液，重懸細(xì)胞

步驟4：按照1~1.5mL/管的量分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標(biāo)記

步驟5：將凍存管直接移入-80℃冰箱中，24h后轉(zhuǎn)移至液氮長期保存

在沒有凍存盒或者非程序凍存液時(shí)，可以選擇手動(dòng)梯度降溫。但手動(dòng)梯度降溫不適用于所有細(xì)胞，且效果不穩(wěn)定，同樣需要先做凍存測試。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠骨髓造血干細(xì)胞

DC細(xì)胞

Detroit 562 (人咽頭癌胸水轉(zhuǎn)移細(xì)胞)

DH82 (犬巨噬細(xì)胞/狗腎惡性組織細(xì)胞增生癥細(xì)胞)

DLD-1 (人結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞)

DMS 153 (人小細(xì)胞肺癌)

DT40 (雞淋巴瘤細(xì)胞)

DU 145 (人前列腺癌細(xì)胞)

E.G7-OVA (小鼠T淋巴瘤細(xì)胞)

EA.hy926 (人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞)

EAC (小鼠艾氏腹水癌細(xì)胞)

EB-3 (人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞)

EBTr [NBL-4] (牛胚氣管細(xì)胞)

Eca-109 (人食管癌細(xì)胞)

ECV-304 (人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞) (T24污染細(xì)胞系，暫不供應(yīng))

人膽suan(Cholic acid)檢測試劑盒

人OJ抗體/抗異亮氨酰tRNA合成mei抗體(OJ/IleRS)ELISA檢測試劑盒

人百日咳病毒抗體(IgA)檢測試劑盒

人β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA Kit

瘧原蟲通用PCR試劑盒

布魯塞爾德克酵母PCR檢測試劑盒

腦膜炎奈瑟菌W群(NM-W)核suan檢測試劑盒

蠟樣芽孢桿菌PCR檢測試劑盒

貓附紅細(xì)胞體（貓嗜血支原體）PCR試劑盒

葡萄糖苷曼氏桿菌PCR試劑盒

皮炎芽生菌PCR試劑盒

小鼠棕色前脂肪細(xì)胞貓支原體PCR試劑盒

貓傳染性腹膜炎（FIP)PCR檢測試劑盒（熒光-PCR法）

皰疹病毒PCR檢測試劑盒

牛源性成分(Bovine)核suan檢測試劑盒