人弓形蟲（Tox）Elisa試劑盒說明書

人弓形蟲（Tox）Elisa試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍:96T

使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中弓形蟲（Tox）表達(dá)。

實驗原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人弓形蟲（Tox）表達(dá)。用純化的人弓形蟲（Tox）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中弓形蟲（Tox）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的弓形蟲（Tox）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中人弓形蟲（Tox）的存在與否。

人弓形蟲（Tox）Elisa試劑盒組成:

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶

2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 陽性對照 0.5ml×1 瓶

3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 陰性對照 0.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份

5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張

6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個

標(biāo)本要求:

1.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作步驟:

1.編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2 孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計算和結(jié)果判定：

臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為弓形蟲（Tox）陽性

陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為弓形蟲（Tox）陰性。

注意事項:

1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號組分不得混用。

2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5.底物請避光保存。

6.試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm

7.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。

保存條件及有效期:

1.試劑盒保存：2-8℃。

2.有效期：6個月