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人S100鈣結(jié)合蛋白A8/鈣粒蛋白A elisa試劑盒操作步驟

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  1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

40μg/L

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

20μg/L

4號標準品

150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

10μg/L

3號標準品

150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

5μg/L

2號標準品

150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.5μg/L

1號標準品

150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 

  1. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
  2. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
  3. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
  4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
  5. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
  6. 溫育：操作同3。
  7. 洗滌：操作同5。
  8. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
  9. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
  10. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

 

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